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qPCR kits & 核酸抽提

  

BioTNT mRNA QPCR 实验相关产品订购指南:

 

一、RNA 抽提:

经验证,可以使用以下产品进行样品RNA 抽提, RNA抽提质量符合QPCR Array实验样本质量要求:

品名 货号 产品分类 品牌 规格
TRIZol®   RNA提取试剂盒(组织、细胞) A2010A0401 qPCR kits/RNA 抽提 BioTNT 50T
TRIZol®   RNA提取试剂盒(组织、细胞) A2010A0402 qPCR kits/RNA 抽提 BioTNT 100T
TRIZol®   RNA提取试剂盒(组织、细胞) A2010A0403 qPCR kits/RNA 抽提 BioTNT 200T
A2010A101组织RNA抽提试剂盒(磁珠法) A2010A101 qPCR kits/RNA 抽提 BioTNT 50T
A2010A102   血液RNA提取试剂盒(磁珠法) A2010A102 qPCR kits/RNA 抽提 BioTNT 50T
A2010A103   石蜡RNA抽提试剂盒(磁珠法) A2010A103 qPCR kits/RNA 抽提 BioTNT 50T
A2010A104   细胞RNA抽提试剂盒(磁珠法) A2010A104 qPCR kits/RNA 抽提 BioTNT 50T
A2010A105   病原体RNA抽提试剂盒(磁珠法) A2010A105 qPCR kits/RNA 抽提 BioTNT 50T
RNeasy Mini Kit(50) 74104 RNA 抽提 Qiagen 50T
RNase-Free DNase Set (50) 79254 RNA 抽提 Qiagen 50T


 

请根据您的样本选择抽提试剂盒;无论您是否采用bioTNT 提供的抽提试剂盒,建议您在进行逆转录和QPCR 实验前进行RNA CDNA 样品质量验证;验证方式见附录;

 

二、逆转录实验:

品名 货号 产品分类 品牌 规格
cDNA第一链合成/RNA逆转录试剂盒 A2010A0601 mRNA 试剂盒 BioTNT 50T
cDNA第一链合成/RNA逆转录试剂盒 A2010A0603 mRNA 试剂盒 BioTNT 200T
cDNA第一链合成/RNA逆转录试剂盒 A2010A0602 mRNA 试剂盒 BioTNT 100T
cDNA第一链合成/RNA逆转录试剂盒 A2010A0604 mRNA 试剂盒 BioTNT 20T

 



 

根据您的样品数量,选择逆转录试剂盒的规格;可以在RNA 验证合格后先小批量逆转录样本,并进行样本质量验证;质量合格后进行QPCR实验;

 

三、QPCR

BioTNT 为您提供QPCR 相关的所有试剂:

 

品名

货号

产品分类

品牌

规格

Realtime PCR PreMIX(染料法)

A2010A001

qPCR kits

BioTNT

1ml

Realtime PCR PreMIX(染料法)

A2010A001X5

qPCR kits

BioTNT

5*1ml

Realtime PCR PreMIX(染料法)

A2010A001X10

qPCR kits

BioTNT

10*1ml

Realtime PCR PreMIX(染料法)

A2010A001S

qPCR kits

BioTNT

200ul

 

BioTNT 为您提供Preci® mRNA qPCR 引物对:提供包括human mRNA30000+ )检测,rat mRNA50000+),mouse mRNA30000+)经验证可用于QPCR实验的PCR 引物对;提供可用于均一化检测的内参基因QPCR 引物对(beta actinGAPDH, 18SRNA等);

 

Preci® mRNA qPCR 引物对

BioTNT Preci® mRNA qPCR 预验证129引物对

 

 

四、通用PCR 阳性模板:

产品简介:通用阳性核酸模板是BioTNT公司从众多合作单位中收集的各种品系动物研究模型,分类整理,并分别从心、肝、脾、肺、肾、脑、肌肉、结肠、回肠、尾、眼等组织中利用Qiagen核酸试剂盒抽提并逆转录后得到的寡核苷酸链。经过BioTNT公司的上百次实验验证,本产品对于对照验证实验具有良好效果,是核酸实验成果的最直观表现。

优势:
1、具有广泛的生物学背景,能作为阳性对照应用于 多种分子生物学实验中;
2、广泛的生物学技术运用,可以用于几乎所有核酸 实验,包括SNP,MSP,测序等
3、覆盖实验室经典的大小鼠各种品系,为经典实验 提供有效阳性参照数据;
4、核酸模板具有高特异性,无其他品系基因表达干 扰;
5、核酸模板具有广基因覆盖面,可覆盖单一品系几 乎所有表达的基因;

品名 货号 特性 品牌 规格
PCR Positive   Control (BALB/c Mouse cDNA)(BALB/c小鼠核酸通用PCR阳性模板) A2010A0201 mouse BioTNT 20ul
CR Positive   Control (SD Rat cDNA)(SD大鼠核酸通用PCR阳性模板) A2010A0301 rat BioTNT 20ul

 

附件:

五、样品质量验证:

为了保证PCR Array实验的质量,建议在使用前先进行样本质量验证;

RNA 定量与质量控制

A.使用无菌水(RNase-free)稀释 RNA 样本,检测 260  nm  280  nm 吸光值,A260/280 应大于 1.8

 

B.使用公式A260× 40 ×稀释倍数  = XXXXμg/mL 计算 RNA 浓度。

 

C.使用琼脂糖凝胶电泳检测 RNA 完整性。

 

D.建议:RNA质量测定后,逆转录得到cDNA,建议用多个内参基因自行验证cDNA质量;

推荐购买BioTNT的样本质量验证引物套装,可以在进行qPCR 之前对样本进行验证(包含内参引物,如human beta actin GAPDH,  18sRNA)

 

E.基因组DNA污染控制

每个Array板块上的GDC(Genomic  DNA  Control)反应孔专为检测每个样品进行qPCR反应时可能存在的基因组DNA污染而设置。如果该反应孔的CT值小于35,则表明存在可检测到的基因组DNA污染,应采取措施予以解决。因此,必须从RNA样品中去除基因组和其他全部残余污染物。建议抽提时加入DNAse去除基因组污染。

建议在进行PCR Array 之前购买BioTNT 样本质量验证引物套装或者单独的GDC引物进行基因组DNA 污染控制的质量验证;验证结果CT 值如果小于35,则表明存在可检测到的基因组DNA污染,应采取措施予以解决。

 

 

品牌 货号 品名 规格 特性 价格
BioTNT A2010A001 Realtime PCR PreMIX(染料法) 1ml ¥290
¥225
BioTNT A2010A001S PCR premix (染料法)for mRNA 200ul 询价
询价
BioTNT A2010A001X10 PCR premix (染料法)for mRNA 10*1ml ¥3250
¥2500
BioTNT A2010A001X5 PCR premix (染料法)for mRNA 5*1ml ¥1820
¥1400
BioTNT A2010A0201 PCR Positive Control (BALB/c Mouse cDNA)(BALB/c小鼠核酸通用PCR阳性模板) 20ul mouse ¥630
¥488
BioTNT A2010A0301 PCR Positive Control (SD Rat cDNA)(SD大鼠核酸通用PCR阳性模板) 20ul rat ¥630
¥488
BioTNT A2010A0401 TRIZol® RNA提取试剂盒(组织、细胞) 50T ¥1170
¥900
BioTNT A2010A0402 TRIZol® RNA提取试剂盒(组织、细胞) 100T ¥2080
¥1600
BioTNT A2010A0403 TRIZol® RNA提取试剂盒(组织、细胞) 200T ¥3740
¥2880
BioTNT A2010A0404 核酸样品保存液DNA/RNA 100ml ¥840
¥650
BioTNT A2010A0405 核酸样品保存液DNA/RNA 50ml ¥460
¥350
BioTNT A2010A0601 cDNA第一链合成/RNA逆转录试剂盒 50T ¥1300
¥998
BioTNT A2010A0602 cDNA第一链合成/RNA逆转录试剂盒 100T ¥2070
¥1590
BioTNT A2010A0603 cDNA第一链合成/RNA逆转录试剂盒 200T ¥3370
¥2596
BioTNT A2010A0604 cDNA第一链合成/RNA逆转录试剂盒 20T ¥520
¥399
BioTNT A2010A101 A2010A101组织RNA抽提试剂盒(磁珠法) 50T ¥1660
¥1280
BioTNT A2010A102 A2010A102 血液RNA提取试剂盒(磁珠法) 50T ¥1530
¥1180
BioTNT A2010A103 A2010A103 石蜡RNA抽提试剂盒(磁珠法) 50T ¥2030
¥1560
BioTNT A2010A104 A2010A104 细胞RNA抽提试剂盒(磁珠法) 50T ¥1620
¥1250
BioTNT A2010A105 A2010A105 病原体RNA抽提试剂盒(磁珠法) 50T ¥1560
¥1200
BioTNT A2010A106 石蜡RNA抽提试剂盒(磁珠法) 50T ¥2480
¥1908
BioTNT A2010A111 A2010A111 组织DNA抽提试剂盒(磁珠法) 50T ¥1660
¥1280
BioTNT A2010A112 A2010A112全血基因组DNA提取试剂盒(磁珠法) 50T ¥1300
¥1000
BioTNT A2010A113 A2010A113石蜡组织切片DNA提取试剂盒(磁珠法) 50T ¥1790
¥1380
BioTNT A2010A114 A2010A114细胞DNA提取试剂盒(磁珠法) 50T ¥1620
¥1250
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核酸保存液产品介绍:

品名 货号 规格 样本 适用实验
核酸样品保存液DNA/RNA  A2010A0405  50ml  细胞,组织 DNA/RNA抽提
核酸样品保存液DNA/RNA  A2010A0404  100ml  细胞,组织 DNA/RNA抽提

特点:

水溶性的、新型的核酸稳定试剂;

可以高效灭活样本中的DNA 酶和RNA 酶;

保护非冷冻样本中的核酸(DNA /RNA)于原位;

常温保存至少1周时间,在-20度或-70度长期保存;

用于细胞、组织,多种拭子样本的保存、运输;

不适用于全血样本中DNA/RNA的保存。


BioTNT RNA 抽提磁珠法产品介绍:

品名

货号

分类

品牌

规格

样本

适用实验

A2010A101组织RNA抽提试剂盒(磁珠法)

A2010A101

RNA 提取

BioTNT

50T

组织

适用于mRNA, lncRNA,microRNA,病毒RNA检测,PCR Array实验

A2010A102 血液RNA提取试剂盒(磁珠法)

A2010A102

RNA 提取

BioTNT

50T

血清,血浆,全血

适用于mRNA, lncRNA,microRNA,病毒RNA检测,PCR Array实验

A2010A103 石蜡RNA抽提试剂盒(磁珠法)

A2010A103

RNA 提取

BioTNT

50T

石蜡组织切片

适用于mRNA, lncRNA,microRNA,病毒RNA检测,PCR Array实验

A2010A104 细胞RNA抽提试剂盒(磁珠法)

A2010A104

RNA 提取

BioTNT

50T

细胞

适用于mRNA, lncRNA,microRNA,病毒RNA检测,PCR Array实验

A2010A105 病原体RNA抽提试剂盒(磁珠法)

A2010A105

RNA 提取

BioTNT

50T

体液,血清,血浆等液体

适用于病原体RNA检测


BioTNT DNA 抽提磁珠法产品介绍:

品名

货号

分类

品牌

规格

样本

适用实验

A2010A111 组织DNA抽提试剂盒(磁珠法)

A2010A111

DNA 提取

BioTNT

50T

组织

基因组DNA,线粒体DNA,病毒DNA检测,SNP实验,chip实验,甲基化实验

A2010A112全血基因组DNA提取试剂盒(磁珠法)

A2010A112

DNA 提取

BioTNT

50T

血清,血浆,全血

基因组DNA,线粒体DNA,病毒DNA检测,SNP实验,chip实验,甲基化实验

A2010A113石蜡组织切片DNA提取试剂盒(磁珠法)

A2010A113

DNA 提取

BioTNT

50T

石蜡组织切片

基因组DNA,线粒体DNA,病毒DNA检测,SNP实验,chip实验,甲基化实验

A2010A114细胞DNA提取试剂盒(磁珠法)

A2010A114

DNA 提取

BioTNT

50T

细胞

基因组DNA,线粒体DNA,病毒DNA检测,SNP实验,chip实验,甲基化实验

A2010A115 病原体DNA提取试剂盒(磁珠法)

A2010A115

DNA 提取

BioTNT

50T

体液,血清,血浆等液体

病原体DNA检测

 

BioTNT 总核酸DNA/RNA双抽磁珠法产品介绍:

品名

货号

分类

品牌

规格

样本

适用实验

A2010A201组织核酸DNA$RNA双抽试剂盒(磁珠法

A2010A201

总核酸(DNA/RNA)提取

BioTNT

50T

组织

适用于RNA 和DNA 实验

A2010A202血液核酸DNA$RNA双抽提取试剂盒(磁珠法)

A2010A202

总核酸(DNA/RNA)提取

BioTNT

50T

血清,血浆,全血

适用于RNA 和DNA 实验

A2010A203石蜡组织切片核酸DNA$RNA双抽试剂盒(磁珠法)

A2010A203

总核酸(DNA/RNA)提取

BioTNT

50T

石蜡组织切片

适用于RNA 和DNA 实验

A2010A204细胞核酸DNA$RNA双抽试剂盒(磁珠法)

A2010A204

总核酸(DNA/RNA)提取

BioTNT

50T

细胞

适用于RNA 和DNA 实验

A2010A205病原体核酸DNA$RNA双抽试剂盒(磁珠法)

A2010A205

总核酸(DNA/RNA)提取

BioTNT

50T

体液,血清,血浆等液体

适用于病原体RNA 和DNA   实验

 

配套磁力架介绍:

BioTNT 提供以下各种规格的磁力架产品,可以用于核酸抽提如DNA 抽提,RNA 抽提的磁珠法试剂盒;可以作为IP实验,COIP 实验,CHIP 实验的磁珠法试剂盒的配套小设备; 磁珠(Mag Beads)的分离效果,一般强于琼脂糖珠子(Agorose beads)。 如不购买磁力架,BioTNT 磁珠法抽提试剂盒,也可以用离心机进行实验操作。

品名 货号 规格
双排8孔磁力架 BMB08-1.5-2 1.5ml/2ml
96孔PCR磁力架 BMB-96D 200ul
多功能磁力架 BMB-01 200ul八排管*4排;200ulEP管*32孔;1.5ml/2ml*16孔;15ml离心管*2孔

 

其他:

品名

货号

分类

品牌

规格

样本

适用实验

TRIZol® RNA提取试剂盒(组织、细胞)

A2010A0401

RNA提取

BioTNT

50T

组织,细胞

适用于mRNA,   lncRNA,microRNA实验

TRIZol® RNA提取试剂盒(组织、细胞)

A2010A0402

RNA提取

BioTNT

100T

组织,细胞

适用于mRNA,   lncRNA,microRNA实验

TRIZol® RNA提取试剂盒(组织、细胞)

A2010A0403

RNA提取

BioTNT

200T

组织,细胞

适用于mRNA,   lncRNA,microRNA实验

 


其他品牌RNA 抽提试剂盒介绍:

 

品名

货号

分类

品牌

规格

样本

适用实验

miRNeasy Serum/Plasma Kit(50

217184

RNA提取

Qiagen

50T

microRNA

血清/血浆中microRNA抽提

miRNeasy FFPE kit(50

217504

RNA提取

Qiagen

50T

microRNA

石蜡样本中microRNA抽提

RNeasy Micro Kit(50

74004

RNA提取

Qiagen

50T

microRNA

细胞/组织中microRNA 抽提,不推荐

RNeasy Mini Kit(50

74104

RNA提取

Qiagen

50T

mRNA

细胞/组织样本中mRNA 等抽提

RNase-Free DNase Set (50)

79254

RNA提取

Qiagen

50T

RNA样本中去除基因组DNA

 

NOTE:

进行microRNA QPCR 检测,可以用总RNA 抽提的方式,得到总RNA,这样可以同时检测microRNA 和mRNA,lncRNA等;

 

细胞/组织中可以抽提基因组DNA 和总RNA;可以检测mRNA, microRNA,lncRNA 等;

石蜡样本中mRNA 发生降解后,抽提microRNA 和DNA 是比较稳定和可行的;

血清/血浆/全血中可以抽提DNA 和总RNA;

其中血清/血浆中microRNA 含量比较稳定,mRNA 含量较少;全血中可以分离淋巴细胞后抽提总RNA, 也可以直接抽提总RNA。

 

其他产品:

 

品名

货号

产品分类

品牌

规格

人外周血淋巴细胞分离液

P8610

样本处理

国产品牌

200ml

小鼠外周血淋巴细胞分离液

P8620

样本处理

国产品牌

200ml

大鼠外周血淋巴细胞分离液

P8630

样本处理

国产品牌

200ml

牛外周血淋巴细胞分离液

P8640

样本处理

国产品牌

200ml

鱼(淡水)全血淋巴细胞分离液

P8700

样本处理

国产品牌

100ml

狗外周血淋巴细胞分离液

P8730

样本处理

国产品牌

200ml

鸡外周血淋巴细胞分离液

P8740

样本处理

国产品牌

200ml

豚鼠外周血淋巴细胞分离液

P8750

样本处理

国产品牌

200ml

兔外周血淋巴细胞分离液

P8760

样本处理

国产品牌

200ml

猪外周血淋巴细胞分离液

P8770

样本处理

国产品牌

200ml

*说明书下载


 BioTNT 十五年real time PCR mRNA 检测倾情服务!  优质服务品质回报社会!

BioTNT 生物技术服务部自从1999年成立以来,承接了超过5000个qPCR 技术服务项目,积累了广泛的qPCR 定量检测的经验。

 

一、荧光定量PCR概述

 

聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)自诞生之日起就决定了它不仅是一种高敏感、高特异的检测核酸分子的定性方法,而且也是一个能对核酸分子进行精确定量的有力工具。

 

 

 

 

 

 

 

随着分子生物学技术研究的不断进展,定量PCR技术取得了突飞猛进的发展,实时定量PCR (real-time quantitative PCR)技术便是一种具有革命性意义的定量PCR技术。所谓实时定量PCR是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程,对起始模板进行定量分析的方法。

  目前实时定量PCR作为一个极有效的实验方法,已被广泛地应用于分子生物学研究的各个领域,仅 2000-2001年,收录在Medline上的以real-time PCR为关键词的文章就达1000多篇。实时PCR技术较之以前的以终点法进行定量的PCR技术具有无与伦比的优势。首先,它不仅操作简便、快速高效,而且具有很高的敏感性和特异性。其次,由于是在封闭的体系中完成扩增并进行实时测定,大大降低了污染的可能性并且无须在扩增后进行操作。

   实时荧光定量PCR技术即是在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实 时荧光定量PCR避免了传统PCR以终产物检测定量产生的偏差,提高实验的重复性。该技术已被广泛用于检测细胞mRNA表达量的变化;比较不同组织的 mRNA表达差异;验证基因芯片,siRNA干扰的实验结果。 

  BioTNT为您提供全套实时荧光定量PCR技术服务,全部实验皆由BioTNT进行品质保证;实验结束后,可以提供客户完整的实验数据;并可以有一次免费的技术培训。

BioTNT mRNA QPCR  检测使用的仪器
 
进行检测使用的主要仪器为QPCR, BioTNT 使用life technology最新款的ViiA™ 7实时荧光定量PCR系统进行microRNA的QPCR 检测。
 

ViiA™ 7实时荧光定量PCR系统在单一的高性能仪器上融合了您需要的所有实时荧光定量PCR特性,从而帮助您优化研究效率。ViiA™7系统具有简单的工作流 程、直观的软件、触控屏界面以及使误操作降至最少的单键实验方案,可提供出众的重复性和最小的孔间和仪器间差异。

产率
ViiA™ 7系统适用于中等至高通量实时荧光定量PCR,可提升您的实验室效率。
快速的加热块更换——前开门设计使热循环加热模块的更换变得更容易,无需移动旁边的设备,如机械臂或计算机
简单的触摸屏界面——仪器触摸屏提供了一键式实验方案,可快速简单地完成各种应用Assay的设置
自动化兼容性——ViiA™ 7系统结合了Applied Biosystems® Twister® II 机器人,使您在自动化环境下实现效率最大化

整合
可与TaqMan® Array微流体芯片和 Applied Biosystems® TaqMan® Assay完全兼容:实时荧光定量PCR分析的金标准,具有高灵敏度、高特异性和宽动态范围。
384 孔通量且无需机器辅助——采用TaqMan® Array微流体芯片,无需移液机器人或复杂的移液装置;只需加入您的样本和预混液,即可在ViiA™ 7系统上运行
与全套 TaqMan® Assay 兼容——ViiA™ 7系统已经过优化,可用于所有TaqMan® Assay(包括 MicroRNA、蛋白质、非编码 RNA 和Pri-miRNA Assay),从而获得清晰简洁的数据

性能
ViiA™ 7系统具有下列特点:
OptiFlex® 系统——增强型荧光检测,可实现准确且灵敏的数据分析
最大程度的多重分析能力——6 个可自由组合的激发和发射滤光片通道,可实现最多的染料组合和最大的多重反应能力
灵活的数据采集——多种升降温方法检测形式为升降温阶段的荧光数据采集提供了更多的灵活性
精确定量——在单色反应中可检测出低至1.5倍的拷贝数差异

ViiA™ 7软件具有:
直观的界面和创新的设计
便捷的自动化操作
更强大的数据分析
与高通量完全兼容

可扩展的软件构架
提供可选的附加性能,可升级至现有软件。
遵循美国联邦法规第21章第11节(21 CFR Part 11)——可选的SAE模块,提供记录安全、审计和电子签名信息,从而实现全方位的数据可追溯性
高分辨率熔解曲线(HRM)——采用内置的MeltDoctor™ 实验方案和校准,您可以缩短优化运行的时间,从而将更多的时间用于分析您的结果。通过方便的软件设置即可根据需要设置基因型种类的数目。

仪器

 

 

二、荧光定量化学原理介绍

 目前比较主流的有两类,一类是特异性荧光探针法,以taqman 荧光探针为代表;

 一类是非特异的荧光染料法,这个以sybgreen 染料为代表。

TaqMan荧光探针
   PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,该探针为一寡核苷酸,两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时,报告 基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR扩增时,Taq酶的5'-3'外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统 可接收到荧光信号,即每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。如图所示。

 SYBR Green荧光染料
  SYBR Green是一种DNA结合染料,能掺入到双链DNA中去。在游离状态下,它不发出荧光,但一旦结合到双链DNA中以后,便可以发出荧光。它的最大优点就是可以与任意引物、模板相配合,用于任意反应体系中。

 

 染料法的特点:经济。因为可以通用,荧光染料PCR的使用成本比探针的价格要便宜得多。

但由于染料能与所有的双链DNA结合,所以一旦反应体系中出现非特异扩增,那它就会影响到定量结果的可靠性与重复性。要避免这种不利因素,需要结合熔解曲线来判断产物的特异性,并通过选择良好的引物并优化反应条件以消除非特异性影响。采用sybr green 荧光染料法进行real time PCR 实验,最重要的是熔解曲线和扩增曲线结合起来进行判断。

三、BioTNT QPCR mRNA检测服务样品准备
  
 足量的并且保证纯度的细胞或组织
 
  注意:BioTNT QPCR mRNA 检测的样本取样同Real time PCR  microRNA的组织取样与保存:
1、 取动物的组织,动作要求迅速,尽量避免样本在环境中暴露太久;
2、 讲样本迅速放入无菌无酶的冻存管中,为保证质量,推荐选取Axygen,corning,nunc等国外品牌的冻存管;
3、 在冻存管上做好标记,尽量清晰易辨;在实验记录本上做好记录,尽量详细易查;
4、 将冻存管直接放入液氮中速冻;或加入1ml Trizol 到冻存管中,再放入液氮速冻;
5、 速冻2h 后,将冻存管从液氮转至-80度冰箱,可以保存6个月左右;
 
BioTNT QPCR mRNA 检测的样本取样同Real time PCR  microRNA的细胞取样与保存
1、 悬浮细胞:500g 离心5min 取细胞,用PBS 清洗2-3遍,得细胞,并转至放入冻存管中;
2、 加入1ml Trizol 到冻存管中,吹打混匀;
3、 在冻存管上做好标记,尽量清晰易辨;在实验记录本上做好记录,尽量详细易查;
4、 将冻存管放入液氮速冻,2h 后,转至-80度冰箱,可以保存6个月左右;
尽量及早提取组织或细胞样本中的RNA并逆转录为cDNA,因为即使冻存,降解仍然存在。
样本运输:液氮运输
 
四、BioTNT  mRNA 检测技术服务标准流程:
1、 客户提供样本(组织,细胞或者RNA),请参照取样与保存;
2、 客户提供检测指标;
3、与客户协商内参的选取(人,大鼠,小鼠均有两种内参可以采用);
4、客户样本验证进行抽提,特异性逆转录,QPCR 检测,验证系统是否好用;
5、 客户的大批量样本进行处理,抽提和实验。
 
实验对象为组织样品,组织量不是很少的情况下,可以采用trizol 法进行抽提。取适量(50-100mg)新鲜组织样品或正确保存的组织样品加1ml的RNA抽提试剂Trizol(Invitrogen),匀浆后抽提RNA。
实验对象为细胞样品,细胞数量不是很少的情况下,可以采用trizol 法进行抽提。每份样品取1×106~1×107细胞,PBS清洗细胞,去PBS加1ml的RNA抽提试剂Trizol(Invitrogen),裂解后抽提RNA。

 6、 RNA 特异性逆转录得到内参CDNA, 对样本的质量进行验证;

7、 大批量样本real time PCR实验;使用仪器为:ABI 公司的Vii7;
 
8、 靶基因表达水平结果分析,数据分析方法为:delta delta CT 法;也可以采用相对定量的标准曲线法;
 
9、 提供客户实验报告;包括方法,材料,设备,原始数据和计算数据的成套材料;
 
五、BioTNT real time PCR mRNA检测技术服务收费标准

实验步骤
 
样本制备+验证:
客户提供组织或者细胞样本;
组织样本分为容易匀浆的样本和难匀浆的样本;
  
 

样本处理费用      
样本类型 实验方法与要求 服务项目 单价
易匀浆组织或细胞 Trizol 法 总RNA抽提+逆转录+样本验证 80元/样本
离心柱RNA 抽提试剂盒(Qiagen) 总RNA抽提+逆转录+样本验证 120元/样
全血样本 全血样本,提供淋巴细胞分离细胞 总RNA抽提+逆转录+样本验证 120元/样
全血样本,不提供淋巴细胞分离细胞 淋巴细胞分离+总RNA抽提+逆转录+样本验证 140元/样本
难匀浆的样本 需要手工匀浆,如软骨组织,眼角膜,皮肤等 处理附加费+总RNA抽提+逆转录+样本验证 120元/样本
RNA样本 需提供RNA 检测浓度和纯度; RNA 逆转录+CDNA样本验证 40元/样
CDNA 样本   样本预验证费用 10元/样本
       
QPCR检查费 实验重复 实验费用  
样本数<5 双重复数据(单基因) 300元  
样本数<4 三重复数据(单基因) 300元  
样本数≥5 双重复数据(一个标本一个基因) 65元  
样本数≥4 三重复数据(一个标本一个基因) 80元  
引物设计验证 QPCR费用大于300元(免费) 0元

全套技术服务
您只需提供组织或细胞标本,我们为您完成RNA抽提,cDNA制备,实时定量PCR,标准曲线制备及数据分析的所有步骤。  

【您只需提供】

组织
或,高浓度的Total RNA
或,样品的cDNA
基因序列、来源等背景资料
 
【我们向您提供】 
实验材料、仪器、方法、步骤
供发表的引物序列、扩增曲线、熔解曲线
原始实验数据和计算好的正式实验数据
免费实验培训、技术支持
 
 
BioTNT Real time PCR技术服务风险说明和客户承诺书
 
尊敬的客户,您好:
    非常感谢您采用BioTNT real time PCR 技术服务。使用本服务前,请您详细阅读本说明,希望能够对您的实验有所帮助。
科学研究存在一定风险,为了保障您的实验可以顺利完成,科研经费能够合理应用,BioTNT在长期的科研服务过程中,积累了大量的实践经验,并建立了较为科学,合理的实验流程体系;real time PCR 实验为例,BioTNT经过与不同实验单位的科研合作,总结了以下对实验影响较大的因素:

Ø         不同的样本特性均不同,BioTNT多年来积累了不同样本的抽提,经验较为丰富,但是样本在采集,保存,运输,抽提等环节都会存在不同的问题或风险,所以在实验前BioTNT针对样本情况会跟您沟通,同时也请望您提供部分不重要的样本以进行预实验的摸索和测定;

 

Ø         内参的选择对实验数据的统计有着重要的作用,BioTNT安排了内参的选择这一步骤来为您降低实验和数据统计风险;为了降低整体的经费使用风险,BioTNT的内参验证,为您的费用使用提供了进一步的依据。

 

Ø         针对大样本客户,BioTNT希望通过一步一步的技术服务步骤和分阶段的实验服务,达到有效控制和杜绝经费的浪费。

 

 大样本客户:泛指样本数量超过20个样本进行基因检测的客户;

 

       以下收费和付款方式仅对上海本地客户有效,非上海客户,必须签定技术服务合同,并预付50%,BioTNT 安排样本抽提和预实验;扩大性预实验结束后,BioTNT 核算费用,开具剩余发票并请您付清余款。收到全款后BioTNT 会邮寄数据光盘给您。

 

 

BioTNT Real time PCR技术服务主要内容为:
1.         实验前端:实验订单确认,目的基因设计、确认、合成,样本取样,样本抽提; 
BioTNT 会与您进行基因确认,内参选择和内参验证,并发送相应的实验报告;

 

由于您的样本量比较大,在订单确认后,BioTNT 会根据您的样本量,开具样本抽提费用发票

2.         实验中端:样本的内参筛选,CDNA(样本)内参验证,目的基因验证,预实验,扩大性预实验及相关的验证报告;
a)         对于大样本的客户,进行内参筛选非常重要:不同的内参,实验模型或者用药都可能会影响内参的含量,故要选择内参差异性小的作为正式实验的内参。建议采用内参筛选或者双内参的实验模式;
b)        CDNA内参验证: 内参筛选完成后,BioTNT将对您的CDNA进行一一验证并出具相关的内参验证报告;对于内参验证ct>25CDNA(样本),BioTNT建议客户不用做正式实验数据;
c)         目的基因验证:BioTNT一般设计两对引物,采用同类型的样本验证目的基因,确保所有目的基因为可用的且效率较高,如目的基因不好BioTNT将免费设计新的引物。
d)        预实验验证:随机抽取2-3CDNA样本单孔验证目的基因,确保目的基因为可用的;

 

e)         扩大性预实验:目的基因验证完好,我们将跟您沟通选择5-10个样本(建议选择不同组的样本)进行双复孔的扩大性实验,并提供给您正规的数据报告,并确认此实验结果是否符合您的预期或其他问题请提前沟通。并协商下一步实验方案。

Ø         BioTNT 承诺提供的正式数据是按照客户要求的重复方式,并在扩增曲线,融解曲线以及重复性上能达到实验要求的数据。
Ø         如果扩大性预实验不符合预期,建议采用分批实验的方式,请客户选择下一批要进行实验的样本,并结清本段实验费用。
Ø         如果扩大性预实验符合预期,同样为保险起见,仍建议客户采用分批实验的方式,请客户选择下一批要进行实验的样本,并结清本段实验费用。
Ø         如果扩大性实验符合预期,客户对数据要求比较着急,需要一次性完成下面的实验,请客户通过邮件或者书面申明的方式,告知BioTNT,直接进行正式的实验,并承担实验结果可能不符合预期的风险。请客户结清本段实验费用,并预先开具剩余金额60%的发票。
3.         实验末端:正式实验,实验数据处理,完整数据报告,实验相关流程;
根据上一阶段与客户的协商情况,完成剩余实验,并开具剩余金额的发票。
4.  全额付款后请申请引物序列;
 
 
 
 
 
备注:请您已经了解本次实验的相关风险,并同意上述条款。

 

 

 

 
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