产品参数
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TRIzol® RNA提取试剂盒
试剂盒规格： 货号：A2010A0401（50T），A2010A0402（100T）, A2010A0403（200T）
试剂组成:
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A2010A0401
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50T
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Storage
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TRIzol Reagent（invitrogen，biotnt分装）
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50 mL/vial 1 Vial
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室温
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1-溴-3氯丙烷
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100ml 1瓶
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室温
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75% DEPC水乙醇
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25 mL/vial 1 Vial
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室温
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异丙醇
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25 mL/vial 1 Vial
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室温
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RNase-free ddH2O
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1.5 mL/vial 1 Vial
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室温
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说明书
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1份
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A2010A0402
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100T
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Storage
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TRIzol Reagent（invitrogen）
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100ml 1套
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室温
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1-溴-3氯丙烷
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100ml 1瓶
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室温
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75% DEPC水乙醇
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50 mL/vial 1 Vial
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室温
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异丙醇
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50 mL/vial 1 Vial
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室温
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RNase-free ddH2O
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1.5 mL/vial 2 Vial
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室温
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说明书
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1份
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A2010A0403
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200T
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Storage
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TRIzol Reagent（invitrogen）
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100ml 2套或200ml 1套
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室温
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1-溴-3氯丙烷
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100ml 1瓶
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室温
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75% DEPC水乙醇
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50 mL/vial 2 Vial
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室温
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异丙醇
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50 mL/vial 2 Vial
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室温
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RNase-free ddH2O
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1.5 mL/vial 4 Vial
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室温
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说明书
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1份
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产品介绍
TRIzol®是一种快捷方便的总RNA提取试剂，可以从动物组织、各种微生物及细胞等样本中提取总RNA。在样品处理过程中，TRIzol可完全充分裂解样品，同时保持RNA的完整性。加入1-溴-3氯丙烷离心后，溶液形成上清层（水相）、中间层和有机相（下层）。取出上清层，可用异丙醇沉淀回收RNA；中间层用乙醇沉淀回收DNA；有机相可用异丙醇沉淀回收蛋白。
本试剂盒提取RNA方便快速，整个操作过程可在二个小时内完成，提取的RNA无蛋白和DNA的污染，纯度髙，可直接用于Northern Blotting、斑点杂交、polyA筛选、mRNA纯化、体外翻译、RNase保护分析、RT-PCR、构建cDNA文库等各种分子生物学实验。
产品使用限制
1. 本产品只用于分子生物学研究。其不应用于诊断、预防和治疗疾病。在使用本产品时应遵从相应的注意事项；
2. 本产品中部分试剂有腐蚀性或毒性，勿直接接触皮肤或吞咽；
3. 操作时请穿戴实验服和手套，如接触皮肤，应立即用大量清水冲洗；
4. 误食或其他危急情况，请及时到医院就治；
5. 部分试剂易燃，请注意消防安全。
客户自备设备和试剂
1. 1.5mL Eppendorf管（无菌、无酶、RNase-free；货号A2010B0X04）；
2. RNase-free Tips（1000μL、200μL的枪头；货号A2010B0X09）；
3. 移液器（200μL，1000μL）；
4. 电动匀浆器，组织破碎器或者超声破碎仪；
5. 12000g冷冻离心机；
操作说明
1. 称取100mg湿重组织，加入1000μL的TRIzol，用眼科剪剪碎并用电动匀浆器或者手动匀浆器匀浆，室温（20-25℃）放置5mins，使其充分裂解。
2. 培养细胞至1.5×106以上，加入1000μL的Trizol，用1mL的移液枪来回充分吹打200下左右，或用超声破碎仪破碎细胞。室温（20-25℃）放置5mins，使其充分裂解。
3. 4℃ 12000rpm离心5mins，将上清转移至干净的离心管。
4. 加入 200μL 1-溴-3氯丙烷，上下颠倒混匀，室温放置15mins。注：禁用漩涡振荡器，以免基因组DNA断裂污染。
5. 4℃ 12000rpm离心15mins。
6. 吸取上层水相，至干净的离心管中。
注：千万不要吸取中间界面。若同时提取DNA和蛋白质，则保留下层酚相存于4℃冰箱，若只提RNA，则弃下层酚相。
7. 加入500μL异丙醇，上下颠倒混匀，室温放置10mins。
8. 4℃ 12000rpm离心10mins，弃上清，RNA沉于管底。
9. 加入500μL 75% DEPC水乙醇，温和振荡离心管，悬浮沉淀。
10. 4℃ 8000rpm离心5mins，弃上清。
11. 室温干燥5mins。
12. 加入RNase-free ddH2O溶解RNA样品，57℃金属浴温育5mins。
13. 所得RNA样本 -80℃储存备用。
注意事项
1. 基因组DNA含量较高的样本（如上皮组织），RNA样本很容易残留基因组DNA污染，强烈建议用DNase对基因组DNA进行消化处理。
2. 组织和细胞裂解后，加1-溴-3氯丙烷前，样品可在-80℃放置一个月以上；
3. RNA沉淀可以保存在75% DEPC水乙醇中，-20℃可保存一年以上。
4. 1mL TRIzol可以提取50-100mg组织，组织或细胞用量过多会导致多余组织无法完全裂解释放RNA形成杂质，增加了RNA纯化的难度以及基因组DNA污染的风险。
5. DEPC是可挥发的剧毒物，使用时需在通风厨中操作，高温可水解成乙醇和二氧化碳。
6. 经常更换新手套，以防止RNase污染；
7. 使用无RNase的塑料制品和枪头避免交叉污染；
8. RNA在TRIzol试剂中时短时间内不会被RNase降解，但提取后继续处理过程中应使用不含RNase的塑料或玻璃器皿（玻璃器皿可在150℃烧烤4小时，塑料器皿可在0.5M NaOH中浸泡10分钟，然后用DEPC水彻底清洗，再灭菌，即可去除RNase）；
RNA质量控制
1. 测O.D值定量RNA浓度，测定RNA产物溶液在A260和A280的O.D.值，A260/A280值在1.6-2.0之间说明RNA提取结果良好。（＜1.6时表明有蛋白质或酚污染，＞2.0时表明可能有基因组DNA、异硫氰酸（TRIzol）残存）
2. 逆转录cDNA，将所有样本做一次内参PCR以及基因组内含子内参PCR预实验，判断RNA的量以及基因组DNA污染情况。
参考得率
小鼠肝脏组织：( μg RNA/mg组织) 3.0-5.5 μg；
小鼠肾脏组织：( μg RNA/mg组织) 1.5-3.0 μg；
小鼠脾脏组织：( μg RNA/mg组织) 1.5-3.5 μg；
小鼠心脏组织：( μg RNA/mg组织) 0.4-1.0 μg；
小鼠肺组织：( μg RNA/mg组织) 0.6-1.2 μg；
小鼠脑组织：( μg RNA/mg组织) 0.4-0.8 μg；
293T细胞：( μg RNA/106细胞) 8-10 μg；
Hela细胞：( μg RNA/106细胞) 20 μg。
问题指南
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问题
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原因
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解决方案
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低RNA得率
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裂解不完全
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将第1、2步的沉淀按步骤再处理一遍。
减少初始样本量。
眼科剪处理组织样本时需剪碎一点，使样本与TRIzol充分接触。
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样本质量差
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RNA的得率和质量对样本的新鲜度有较高要求，请使用新鲜样本，或在-80℃中冻存不超过半年的样本。
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RNA复溶操作不正确
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使用无RNA酶的灭菌DEPC ddH2O 或TE缓冲液复溶，复溶体积不能加太多，人为降低了RNA浓度。
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RNA降解
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RNA样本中含有RNase
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将RNA样本按上述步骤再处理一遍。
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样本取材到裂解过程污染
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组织离体或细胞离开培养基后需立即加入TRIzol，保持TRIzol浸没状态，尽早进行RNA提取操作
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逆转录效率低
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RNA样本中残留乙醇
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重复步骤9-13，过程中注重RNA干燥
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RNA样本中残留盐离子
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重复步骤9-13
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A260/A280不在1.7-2.0之间
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蛋白质或酚污染
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重复步骤4-13，再用有机相纯化一遍
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异硫氰酸（TRIzol）残留
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重复步骤4-13，再用有机相纯化一遍
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技术支持
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