BioTNT 关于引物浓度的使用说明
引物primers 分为以下三种：
1、合成的干粉引物：
合成的干粉引物，浓度一般为2OD； 是以O.D.260单位来计量的。
1 O.D.260值系指在1ml体积1cm光程标准比色皿中，于260nm波长下的吸光度为1A260。 1 O.D.260 值相当于33ug的oligo (国际统一标准),而每个碱基的平均分子量一般以330道尔顿进行计算。客户可根据此数据和oligo的分子量得到摩尔数以计算溶液浓度。
分子量计算公式如下:
MW=(A碱基数×312) + (C碱基数×288) + (G碱基数×328) + (T碱基数×303)-61
摩尔数的计算公式如下:
nmol数 = O.D.值×33(ug)÷1000MW
例: 序列GTTGAGTGCTGGGCGTAG, OD260值为2, 加1000ul消毒双蒸水溶解:
A= 2 C= 2 G= 9 T= 5
MW = (2×312) + (2×288) + (9×328) + (5×303) -61=5606
质量数 = 2×33ug= 66ug
nmol数 = 66×1000÷5606=11.77 nmol
● Oligo 呈干粉状黏附在试管壁上,打开时极易散失,所以开试管前应先离心,然后小心打开管盖.配液时请加入适量双蒸水溶解,充分振荡5-10分钟。
● 本核苷酸的5’和 3’端均为羟基，若需加连磷酸基团，则需另外处理。
● 如对oligo进电泳分析，请用含7M尿素的聚丙烯酰胺凝胶电泳和1倍TBE缓冲液，不可使用琼酯糖电泳。为了防止加样时的扩散和二级结构影响，上样前需用饱和尿素处理。 ● -20℃以下长期保存。
举例：引物合成单上标注10nmol；可以用100ul的水复溶，得到100umol/l浓度的储存液；
2、部分实验室使用的引物工作液浓度：
部分实验室习惯将引物工作浓度定为10umol/l; 即在干粉引物复溶后的储存浓度100umol/l的基础上稀释10倍，得到10umol/l的工作浓度；
进行PCR 反应时，通常在10ul 体系中加入0.2ul上游引物，0.2ul的下游引物，得到200nmol/l的终浓度；或者在10ul 体系中加入0.4ul 上游引物，0.4ul的下游引物，得到400nmol/l的终浓度；
优点：引物工作浓度较高，可以作为储存浓度；
缺点：使用时加样体积过小，容易产生较大的加样系统误差；
3、BioTNT 引物筛选提供的引物浓度：
BioTNT 为了方便客户使用，提供的引物浓度为2umol/l， 在终反应体系里是10*的浓度，即20ul 体系中，上游引物加入2ul，下游引物加入2ul。
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