1、Q：引物序列什么时候提供？
A：引物序列一般是在付款后提供，提供方式见如下：
2、Q: 引物扩增的特异性如何保证？
A: 实验验证时，我们的引物一般是用tm 值来确认的；
方式：如下是我们示例的融解曲线，峰的位置是在80.4度；
这先是我们通过oligo 计算出来的理论值，也是在仪器上验证过的；
但不同仪器，不同mix 在仪器上会有所差异，一般差异不超过2度，都可能是正确的；但所有的差异都应该是同一个方向上的；
关于一般建议的验证方式顺序是：
a、TM 验证；（Biotnt 验证）
b、跑胶长度验证；(客户自己进行，请注意不要导致实验室污染）
c、测序验证（测序一般来讲，会有部分前后序列测不准，所以如果您要进行测序验证的话，产物长度一般要大于100bp）（客户自己进行）
3、Q:QPCR的引物长度一般是多少？
A: 关于扩增产物长度：biotnt 一般控制在150bp 之内；这样比较合适做QPCR，特别是两步法的扩增；
4、Q: 引物的扩增效率是多少？
A: Biotnt 引物是设计两对，我们挑选其中比较优的一对给您；
对于扩增效率，您需要自己去验证；一般扩增效率的验证有两种方法：
标准曲线法；或者是很多仪器自己有导出的；
这个我们不提供；
我们提供给您的引物，是两对引物中扩增效率比较优的一对；
简单 的delta delta CT 法，可以比较引物扩增曲线对数曲线的斜率，如果斜率平行，就可以使用delta delta CT 法进行实验和计算；
如果斜率不平行，可以使用相对定量的标准曲线法；
5、 Q： Biotnt 引物提供的浓度是多少？
A：BioTNT 为了方便客户使用，提供的引物浓度为2umol/l， 在终反应体系里是10*的浓度，即20ul 体系中，上游引物加入2ul，下游引物加入2ul。
6、Q：引物序列提供后，我如果想知道引物的特异性，该如何进行blast？
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问题
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解决
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样本没有检测
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核对您的样本种属和基因名称，样本种属有特异性；
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杂乱的熔解曲线
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检查样本内参CT 值，目的基因CT 值：如果样本内参CT 值比较高，目的基因CT 值也比较高，说明样本质量不好，建议更换样本；
如果内参CT 值正常，目的CT 值比较高，熔解曲线杂乱是正常的，说明：可能没有input 目的RNA； 更换阳性样本进行检测；
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熔解曲线峰与BioTNT mRNA引物产品说明书中提供的tm值不一致
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使用biotnt premix，目的产物峰应与引物说明书的Tm 相差不超过两度；如果相差比较大，说明产物不对，建议更换样本或者更换premix。
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熔解曲线峰双峰：在目的产物峰左侧75度左右有一个产物
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75度的峰为引物二聚体峰：CT 值大于33时，出现引物二聚体峰，是正常的；如果CT值低于33，出现引物二聚体和产物的双峰，建议更换biotnt premix 或者更换引物。
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熔解曲线峰双峰：在目的产物峰右侧有一个产物峰
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可能为基因组DNA 产物峰；由于biotnt 为验证过的引物（用biotnt QPCR premix验证），如果样本质量不合格，含有基因组污染，则当引物为跨外显子检测时，部分样本会在目的产物峰右侧出现一个峰（显示样本含有基因组污染），建议重新提取样本或对样本进行DNase 处理；
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引物售后：请提供以下实验数据发送到biotnt@biotnt.com，并抄送给相应的销售；
建议客户使用引物进行实验时设定RNA阴性对照;
设定对照的方式：样本1数据（目的+内参），阴性水样本数据（目的）;设定样本RNA阴性对照（样本的RNA，按照逆转录的稀释比进行稀释），同样做QPCR， 看样本是否存在该基因的基因组污染。