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技术宝典— qPCR
PCR Array 篇(4)----PCR Array FAQ

 1.     任何一台能够做QPCR的仪器据能够做PCRarray吗?

回答:基本上任意一台的QPCR 仪器都可以进行QPCR array的实验。

BioTNT根据仪器采用的96孔或者384孔板,分为以下5种板型(plate format

plate format

Instrument provider

QPCR instrument model

A(384well)

lifetechnologies

7900ViiA7(384 well block)

B(96 well)

lifetechnologies

7300,7500,7700,7900standard 96well),ViiA7standard 96well

C(96 well)

lifetechnologies

7500(fast block)7900HTfast block),stepone plusViiA 7(Fast block)

D(96 well)

Biorad

iCyclerMyiQ, iQ5

E(96 well)

Biorad

CFX96DNA Engine opticonopticon 2Chromo4

请您在订购时提供您使用的QPCR 仪器,我们也可以为您确定plate format;如果您的仪器不在以上清单上,也可以邮件咨询我们,我们会有专业的技术人员为您确定相应的plate format

 

2. BioTNT PCR array的适用在哪里?

回答:适用现有的通路研究;

适用少样本或中等样本,多基因的QPCR 检测;

在低样本或中等样本的情况下,费用和时间远小于自行建立QPCR实验;

使用方便,操作简单,结果稳定性好;

 

3. BioTNT PCR array的优点是什么?

回答:灵敏度高,样本使用量低;

线性范围广,可同时检测表达水平差异大的基因;

每个基因的检测引物优化后保证高扩增率和产物单一;

重复性高,Ct值的平均差异只有0.25个循环;

覆盖范围广:目录产品包含通路分析、疾病研究;

定制产品可根据客户要求选择设置 
数据分析方便:专用软件方便数据统计与分析

 

4. QPCR 得到实验数据后,如何进行后续的结果分析?需要配套的仪器设备吗?

回答: 您可以用这个链接,http://www.biotnt.com/product/PCR-Array.aspx

点击分析工具,然后再点击:分析软件下载下载后进行分析。不需要特殊的分析仪器。

 

5.   BioTNT PCR array,如果自己使用,需要购买哪些配套产品?

回答:您可以用这个链接,http://www.biotnt.com/product/PCR-Array.aspx

点击相关产品;

建议除了您要使用的PCR array 产品之外,您应购买以下产品,对PCR array进行配套使用:

PCR array cDNA第一链合成试剂盒 A2010B0B03  
Real time 染料PCR PreMIX A2010A0112
建议使用高品质的抽提试剂盒,推荐型号为:

Qiagen RNeasy Mini Kit (50) 74104
RNase-Free DNase Set (50)79254 

 

6. 如果使用其他公司的抽提试剂盒,如Trizol 法抽提试剂盒,能否使用BioTNTPCR array产品?

回答:建议抽提时尽量使用高质量的样本,高质量的抽提试剂盒,并在抽提时进行DNA 去除;使用PCR array 产品前,先进行样本质量的验证。能够通过样本质量验证的样本,可以进行PCR array实验。

 

7. 如何进行PCR array 实验前的样本质量验证?

回答:为了保证PCR array实验的质量,建议在使用前先进行样本质量验证;

RNA 定量与质量控制

A.  使用无菌水(RNase-free)稀释 RNA 样本,检测 260  nm  280  nm 吸光值,A260/280 应大于 1.8

B.  使用公式A260× 40 ×稀释倍数  = XXXXμg/mL 计算 RNA 浓度。

C.  使用琼脂糖凝胶电泳检测 RNA 完整性。

D.  建议:RNA 质量测定后,逆转录得到CDNA,建议用多个内参基因自行验证CDNA 质量;

推荐购买biotnt 的样本质量验证引物套装,可以在进行QPCR 之前对样本进行验证(包含内参引物,如human beta actin GAPDH,  18sRNA)

E.  基因组DNA污染控制

每个Array板块上的GDC(Genomic  DNA  Control)反应孔专为检测每个样品进行qPCR反应时可能存在的基因组DNA污染而设置。如果该反应孔的CT值小于35,则表明存在可检测到的基因组DNA污染,应采取措施予以解决。因此,必须从RNA样品中去除基因组和其他全部残余污染物。建议采用Qiagen 柱式抽提过程中加入DNAse去除基因组污染。

建议在进行PCR array 之前购买BioTNT 样本质量验证引物套装或者单独的GDC 引物进行基因组DNA 污染控制的质量验证;验证结果CT 值如果小于35,则表明存在可检测到的基因组DNA污染,应采取措施予以解决。

 

8. 如何进行样本的调平?

回答:进行PCR array之前,对样本需要进行调平。具体调平方式为:  

1.     RNA 含量调平:实验样本的RNA 尽量调到同一水平;加入RNA free的水,调整RNA浓度;

2.   调平后的样本:通过内参引物进行验证,根据CT 值,进行二次调平。

 

9. BioTNT PCR array定制费用如何?

回答:目前BioTNT PCR array 提供您的定制,仅比预制产品增加了400/板的定制费用。您可以把您要检测的指标给我们,然后把您的仪器型号,以及sample 数量,重复数量提供给我们,我们为您设置相应的PCR array 形式,并核算相应的费用给您。

BioTNT PCR array的定制,方式灵活,1 plate起订。

详细请参考:http://www.biotnt.com/product/PCR-Array.aspx,点击定制服务

 

10.        如果我没有QPCR 仪器,BioTNT 能够提供什么服务?

回答:您可以选择BioTNT PCR array service

     详细请参考:http://www.biotnt.com/product/PCR-Array.aspx,点击service

 

产品咨询:[email protected]    BioTNT订阅号:
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