1. 任何一台能够做QPCR的仪器据能够做PCRarray吗?
回答:基本上任意一台的QPCR 仪器都可以进行QPCR array的实验。
BioTNT根据仪器采用的96孔或者384孔板,分为以下5种板型(plate format):
plate format
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Instrument provider
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QPCR instrument model
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A(384well)
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lifetechnologies
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7900,ViiA7(384 well block)
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B(96 well)
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lifetechnologies
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7300,7500,7700,7900(standard 96well),ViiA7(standard 96well)
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C(96 well)
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lifetechnologies
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7500(fast block),7900HT(fast block),stepone plus,ViiA 7(Fast block)
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D(96 well)
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Biorad
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iCycler,MyiQ, iQ5
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E(96 well)
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Biorad
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CFX96,DNA Engine opticon,opticon 2,Chromo4
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请您在订购时提供您使用的QPCR 仪器,我们也可以为您确定plate format;如果您的仪器不在以上清单上,也可以邮件咨询我们,我们会有专业的技术人员为您确定相应的plate format。
2. BioTNT PCR array的适用在哪里?
回答:适用现有的通路研究;
适用少样本或中等样本,多基因的QPCR 检测;
在低样本或中等样本的情况下,费用和时间远小于自行建立QPCR实验;
使用方便,操作简单,结果稳定性好;
3. BioTNT PCR array的优点是什么?
回答:灵敏度高,样本使用量低;
线性范围广,可同时检测表达水平差异大的基因;
每个基因的检测引物优化后保证高扩增率和产物单一;
重复性高,Ct值的平均差异只有0.25个循环;
覆盖范围广:目录产品包含通路分析、疾病研究;
定制产品可根据客户要求选择设置 ;
数据分析方便:专用软件方便数据统计与分析
4. 从QPCR 得到实验数据后,如何进行后续的结果分析?需要配套的仪器设备吗?
回答: 您可以用这个链接,http://www.biotnt.com/product/PCR-Array.aspx
点击分析工具,然后再点击:分析软件下载下载后进行分析。不需要特殊的分析仪器。
5. BioTNT 的PCR array,如果自己使用,需要购买哪些配套产品?
回答:您可以用这个链接,http://www.biotnt.com/product/PCR-Array.aspx
点击相关产品;
建议除了您要使用的PCR array 产品之外,您应购买以下产品,对PCR array进行配套使用:
PCR array cDNA第一链合成试剂盒 A2010B0B03
Real time 染料PCR PreMIX A2010A0112
建议使用高品质的抽提试剂盒,推荐型号为:
Qiagen RNeasy Mini Kit (50) 74104
RNase-Free DNase Set (50),79254
6. 如果使用其他公司的抽提试剂盒,如Trizol 法抽提试剂盒,能否使用BioTNT的PCR array产品?
回答:建议抽提时尽量使用高质量的样本,高质量的抽提试剂盒,并在抽提时进行DNA 去除;使用PCR array 产品前,先进行样本质量的验证。能够通过样本质量验证的样本,可以进行PCR array实验。
7. 如何进行PCR array 实验前的样本质量验证?
回答:为了保证PCR array实验的质量,建议在使用前先进行样本质量验证;
RNA 定量与质量控制
A. 使用无菌水(RNase-free)稀释 RNA 样本,检测 260 nm 和 280 nm 吸光值,A260/280 应大于 1.8。
B. 使用公式A260× 40 ×稀释倍数 = XXXXμg/mL 计算 RNA 浓度。
C. 使用琼脂糖凝胶电泳检测 RNA 完整性。
D. 建议:RNA 质量测定后,逆转录得到CDNA,建议用多个内参基因自行验证CDNA 质量;
推荐购买biotnt 的样本质量验证引物套装,可以在进行QPCR 之前对样本进行验证(包含内参引物,如human beta actin, GAPDH, 18sRNA等)
E. 基因组DNA污染控制
每个Array板块上的GDC(Genomic DNA Control)反应孔专为检测每个样品进行qPCR反应时可能存在的基因组DNA污染而设置。如果该反应孔的CT值小于35,则表明存在可检测到的基因组DNA污染,应采取措施予以解决。因此,必须从RNA样品中去除基因组和其他全部残余污染物。建议采用Qiagen 柱式抽提过程中加入DNAse去除基因组污染。
建议在进行PCR array 之前购买BioTNT 样本质量验证引物套装或者单独的GDC 引物进行基因组DNA 污染控制的质量验证;验证结果CT 值如果小于35,则表明存在可检测到的基因组DNA污染,应采取措施予以解决。
8. 如何进行样本的调平?
回答:进行PCR array之前,对样本需要进行调平。具体调平方式为:
1. RNA 含量调平:实验样本的RNA 尽量调到同一水平;加入RNA 酶free的水,调整RNA浓度;
2. 调平后的样本:通过内参引物进行验证,根据CT 值,进行二次调平。
9. BioTNT PCR array定制费用如何?
回答:目前BioTNT PCR array 提供您的定制,仅比预制产品增加了400元/板的定制费用。您可以把您要检测的指标给我们,然后把您的仪器型号,以及sample 数量,重复数量提供给我们,我们为您设置相应的PCR array 形式,并核算相应的费用给您。
BioTNT PCR array的定制,方式灵活,1 plate起订。
详细请参考:http://www.biotnt.com/product/PCR-Array.aspx,点击定制服务。
10. 如果我没有QPCR 仪器,BioTNT 能够提供什么服务?
回答:您可以选择BioTNT PCR array service。
详细请参考:http://www.biotnt.com/product/PCR-Array.aspx,点击service。