BioTNT 生物技术服务部积累多年的引物设计服务经验，现推出BioTNT 引物定制服务。

 

1. 人/大鼠/小鼠 protein coding gene 引物为目录引物；提供基因ID 即可提供引物产品；
2. 人/大鼠/小鼠 miRNA 引物均为目录引物，提供microRNA 名称即可提供引物试剂盒产品以及Qpcr 检测试剂盒产品；

以下提供定制引物，推荐小程序下单，可以直接填写表单进行定制：

1. Preci®custom引物对，人/大鼠/小鼠小程序搜索不到的，都可以小程序下单；

Preci®custom 引物对；
货号：PRIM1P；
规格：200ul*10um*2
客户必填
填写表单可以下单；
表单内容：
在biotnt 官网可以搜索到所有protein coding 引物的基因ID信息并下单；

1. 普通定制引物：

货号：cust-其他引物
规格：200ul*10um*2

针对以下场景，请选择BioTNT 普通定制引物：

• 针对客户提供的已知特定序列；
• 除了人，大鼠，小鼠三个种属之外的其他种属的mRNA 基因序列；
• 人，大鼠，小鼠三个种属的mRNA 基因序列的特殊指定位置；
• 可以设计qPCR 引物或者普通电泳引物两种类型；

1. lncRNA qPCR 引物定制

货号： cust-lncRNAp
规格： 200ul*10um*2
客户必填：种属（可选）、基因信息编号、数据库（可选）；
客户可填：备注；
lncRNA的序列查找，引物设计和实验方案推荐：
BioTNT 的lncRNA引物设计验证服务
（一）序列查找；
ncbi 查找lncRNA序列；
ensemble 查找lncRNA 序列；
（二）序列比对：
把查找到lncRNA 序列在ncbi blast 里面进行序列比对；
要求：设计的区段必须是特异的区段；
由于ensemble 数据库与ncbi 数据库的不统一，会出现很多难以确认的序列，需要与客户进行沟通确认；
不能确认的序列就不能设计了；
找不到特异的大约200bp 左右的序列片段，原则上也不能进行设计；比较短的特异性序列，建议客户可以更改探针法进行设计；
（三）引物设计的原则：
找到特异性序列，就要进行设计了；设计好的序列再进行RNA 序列和基因组序列的比对；
由于lncRNA 通常表达量很少，所以为了排除引物的原因，我们推荐在同一个外显子内进行设计，这样设计出来的引物可以用基因组样本进行验证；
引物设计还应该符合qPCR 的其他原则，如引物长度，产物长度，TM 值，退火温度；引物二级结构良好等特点，在oligo软件中进行引物结构分析；
（四）引物特异性比对：
请选用同种属的基因组序列和RNA 序列对引物进行特异性比对；良好的引物应该符合特异性要求；
（五）设计的原则
引物合成验证：
引物采用Page 纯化，合成后引物应该进行qPCR 实验验证，模板采用基因组DNA 的模板进行验证，得到的产物扩增曲线S 型，熔解曲线单峰，且TM 与引物设计的TM 值相差不超过2度；
 
（六）提供产品：
提供两支引物，上下游，浓度为10um，体积为200ul，采用标准的qPCR 两步退火方式；可以进行500T的检测；
客户需要准备的：
（一）样本是否需要去除基因组：
由于lncRNA的序列我们采用了同一个外显子的设计方式，所以扩增产物可以在基因组上找到，所以如果想要得到准确的表达结果，样本中应该进行基因组的去除处理，可以在抽提的时候进行基因组去除，也可以在逆转录的时候进行基因组去除；
您也可以同时抽提一些含基因组的样本，用于引物的验证；
（二）RNA抽提方法：
尽量采用抽提总RNA 方法进行抽提；
（三）逆转录方式：
当然，如果要检测lncRNA，由于序列不存在poly A 尾，所以在抽提了RNA, 进行逆转录时，请选择用随机引物逆转录，或者用特异性引物进行逆转录；
所以，抽提的RNA，用mRNA 的oligodT+随机引物的逆转录方式，也是可以检测lncRNA 的；
（四）内参选择：
根据抽提的方式和样本的情况，如果是抽提总RNA的，可以用GAPDH，actb作为内参。
 
LncRNA 引物定制下单的表单：
需要填写：种属，基因信息编号，数据库；以及备注
 
 

 

1. Chip qPCR 引物定制（定位设计）  cust-Chipp

货号：cust-Chipp
规格：200ul*10um*2
客户必填：种属（可选）、基因名称、基因ID、定位信息；
客户可填：备注；
 
Chip qpCR定位设计：
1）.查找该基因的启动子区域；
2）.客户指定设计区段，或者设计位点，我们设计qpCR引物；
3）.合成引物，在基因组DNA上验证，提供客户相应的引物；


 

1. Chip qPCR 引物定制（分段设计）4套

货号：cust-Chipp
规格：200ul*10um*2*4
Chip qpCR分段设计：
客户必填：种属（可选）、基因ID、基因名称；
客户可填：备注；
 
 
1）.查找该基因的启动子区域；一般位2000bp
2）.根据2000bp，进行分段设计，一般为1-500,501-1000,1001-1500,1501-2000四个区段，尽量设计在每个区段的中部，引物长度为60-150bp，符合qPCR引物设计原则；设计好的引物用primer blast进行比对保证异性；
3）.合成引物，在基因组DNA上验证，提供客户相应的引物；
4）.引物计算TM值与验证TM值接近，通过特异性验证的方向提供给客户；
5）.提供给客户的产品为200ul*2（浓度为10um）的四套产品；


 
 

 

1. pri-miRNA 引物定制

货号：cust-pri
规格：500T
客户必填：种属（可选）、名称；
客户可填：备注；

1. pre-miRNA 引物定制

货号：cust-pre
规格：500T
客户必填：种属（可选）、名称；
客户可填：备注；
 
 
Pre-miRNA 和pri-miRNA的序列查找，引物设计和实验方案推荐
BioTNT 的引物设计验证服务
（一）序列查找；
ncbi 查找Pre-miRNA序列；
而pri-miRNA 的序列呢，则是pre 序列的扩展序列；
这是右侧的序列起始，我们可以根据这个序列，向上和向下进行扩展（先各扩展50bp）；
扩展后得到的就是pri microRNA 的序列；

（二）引物设计：
根据这个序列，就要进行设计了；当然这个序列的设计也是有技巧的，最重要的原则是：Pre 和Pri 要能够区分；
引物Pri 序列中是包含Pre 序列的，所以我们设计时，总不能Pri 的序列设计出来, Pre 的序列也能扩出来；
所以我们把Pri 序列分为3个部分，分别为1（5‘端扩展序列），2（pre 序列），3（3‘端扩展序列）；所以，上游引物的位置和下游引物的位置，这几种搭配是可以的：
1+2；2+3；1+3；
引物设计还应该符合qPCR 的其他原则，如引物长度，产物长度，TM 值，退火温度；引物二级结构良好等特点，在oligo软件中进行引物结构分析；
（三）引物特异性比对：
请选用同种属的基因组序列对引物进行特异性比对；良好的引物应该符合特异性要求；
（四）引物合成验证：
引物采用Page 纯化，合成后引物应该进行qPCR 实验验证，模板采用基因组DNA 的模板进行验证，得到的产物扩增曲线S 型，熔解曲线单峰，且TM 与引物设计的TM 值相差不超过2度；
 
（五）提供产品：
提供两支引物，上下游，浓度为10um，体积为200ul，采用标准的qPCR 两步退火方式；可以进行500T的检测；
客户需要准备的：
（一）样本是否需要去除基因组：
由于pre-miRNA的序列和pri-miRNA 序列都可以在基因组上找到，所以如果想要得到准确的表达结果，样本中应该进行基因组的去除处理，可以在抽提的时候进行基因组去除，也可以在逆转录的时候进行基因组去除；
（二）RNA抽提方法：
尽量采用抽提总RNA 方法进行抽提；这个和microRNA 不同，microRNA 可以采用专门抽提的方式或者总RNA 抽提方式，不能采用仅使用mRNA的抽提方式；
（三）逆转录方式：
当然，如果要检测Pre-miRNA，由于序列不存在poly A 尾，所以在抽提了RNA, 进行逆转录时，请选择用随机引物逆转录，或者用特异性引物进行逆转录；
pri-miRNA 的逆转录方式，也是同上面的；
所以，抽提的RNA，用mRNA 的oligodT+随机引物的逆转录方式，也是可以检测PremicroRNA 和PrimicroRNA的；
这个和microRNA 的检测采用茎环法逆转录也是不同的；
（四）内参选择：
根据抽提的方式和样本的情况，如果是抽提总RNA的，可以用GAPDH，actb作为内参。

1. gRNA定制服务

货号：cust-gRNA
产品类型：质粒、慢病毒
产品规格：三对gRNA（gRNA*3）、三合一（3gRNA all in one）
客户必填：种属、基因名称、基因ID；
客户可填：备注；