氯仿作为常年活跃在实验室的有机溶剂，可用于酚氯仿法提取 RNA 实验中，分离 DNA、RNA 和蛋白质。

每次提 RNA 之前都要全副武装，一方面是因为用传统的酚氯仿法提取 RNA 时会用到氯仿，加氯仿时把即使把通风橱风力开到最大，还是有可能不小心吸入，头晕恶心一整天。

另一方面是 RNA 容易降解，如果一不小心降解了，痛苦再来一遍。

氯仿的性质与毒性

氯仿（Chloroform），三氯甲烷，分子式为 CHCI3，无色透明液体，有特殊气味，具有挥发性。在光照下遇空气易被氧化生成剧毒的光气 ，需保存在密封的棕色瓶中 [1]。

氯仿因其麻醉特性而闻名，但是对剂量要求很高，因安全问题被逐渐替代。氯仿属于第二类易制毒化学品，对人体中枢神经系统具有麻醉作用，还会损伤人体的器官如心、肝、肾等。

氯仿可通过人体的呼吸系统、消化道和皮肤进入人体。皮肤接触氯仿会出现湿热症状，可致红斑、水肿、水疱等。短期接触氯仿后，初期会有头痛、头晕、恶心、呕吐、乏力等中毒症状，严重者会出现精神紊乱、呼吸麻痹、反射消失、意识障碍等症状 [2]。

如果长期或反复接触氯仿可能导致慢性中毒，主要症状为头痛、呕吐、食欲减退、消化不良、乏力、失眠等，出现肝脏损害，少数有肾损害及嗜氯仿癖。 氯仿属于世界卫生组织国际癌症研究机构公布的致癌物清单中的 2B 类致癌物 [3]。

氯仿在 RNA 提取的作用

在实验室中，氯仿的作用往往是溶剂，因为它相对稳定，不容易起化学反应，并能溶于许多有机化合物。

在提取 RNA 时，加入氯仿的主要目的是加速有机相和水相的分层，RNA 仅存在于上层水相，回收水相可将蛋白与 RNA 分离。

RNA 提取时，加入氯仿后溶液分为三层：上清液（水相，含有 RNA），中间层（白色薄层，含有蛋白质和DNA），下层有机相（含有氯仿、蛋白质、多糖、脂肪酸、DNA 等）。在酸性条件下，总 RNA 保留在上层水相中，而大部分 DNA 和蛋白质保留在中间相或下层有机相中。然后通过用异丙醇沉淀回收总 RNA。

氯仿的作用有多个方面 [4]：

1、变性蛋白质的作用，使蛋白从溶液析出，形成沉淀，并通过离心除去，同时也通过变性作用抑制 RNase 活性。

2、RNA 提取试剂中通常含有苯酚，苯酚微溶于水，残留会损伤核酸，需要通过氯仿把水相里的苯酚抽提掉。

3、作为溶剂抽提样品中的一些脂溶性杂质（比如油脂、脂溶性色素等），起到一定除杂作用。

使用氯仿时注意事项 [5]

氯仿具有毒性，接触空气能迅速挥发，因此实验操作时需做好防护，长期使用需注意身体是否出现不良症状。

1、操作人员应充分做好防护措施，穿戴实验服、防护手套和护目镜等，同时，应在通风良好的环境中进行操作，如通风橱。

2、氯仿是有机溶剂，移取时应使用耐有机溶剂的枪头，最好使用带滤芯的枪头，防止氯仿吸入移液枪内部，腐蚀移液枪。

3、移取氯仿时，可以通过多次吸排液体使吸头湿润，改善移液时液体滴漏的情况。

4、由于氯仿挥发性强，取出的氯仿应尽快使用，并尽快将瓶盖拧紧，以防止氯仿挥发。

5、使用前，需要注意试验中配置试剂的日期，氯仿对光敏感，长期放置会分解成毒性较大的光气。

在操作时应谨慎小心，如不慎接触到氯仿要及时处理。

• 皮肤接触：立即脱去污染的衣物，用大量流动清水冲洗至少 15 min，然后就医。
• 眼睛接触：立即提起眼睑，用大量流动清水或生理盐水彻底冲洗至少 15 min，然后就医。
• 吸入：迅速脱离现场至空气新鲜处，保持呼吸道通畅。
• 食入：漱口，饮足量温水，催吐，然后就医。

氯仿属于易制毒试剂，根据《危险化学品安全管理条例》《易制毒化学品管理条例》受公安部门管制，实验室购买及使用受限。

氯仿替代品，在用Trizol试剂法进行RNA或DNA抽提时可完全替代氯仿。氯仿是一种高毒性的有机溶剂，有致癌性，在购买上也属于管制范围。但在生物学试验中又难免需要用到氯仿，如用Trizol试剂法提取RNA就需加氯仿，本产品毒性小，由于该试剂具有更强的疏水性，提取时候可形成更紧密的中间层，大大减少了DNA和蛋白的残留和误吸中间层的几率，提取效果更佳。

品名：氯仿替代物；

规格：100ml；

注意事项

使用本产品时请穿实验服，佩戴手套、口罩、面罩等。

本产品具有挥发性，请于通风橱中使用。使用完后及时拧紧瓶盖。

使用说明

在使用Trizol提RNA时，只需将加入200 µL的氯仿替代为加入200 µL的该试剂，其余操作步骤不变。