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ELISA Reasgents

产品介绍:

 

BioTNT 推出升级版ELISA包被经济套餐3(5块板),方便客户进行ELISA 的包被实验。可用于进口未包被ELISA 抗体对进行包被实验的配套使用, 品质优良, 完全可以替代原装进口产品。也可用于实验室自己进行ELISA的构建研究。经测试,比原试剂盒提供的缓冲液配方可以显著提高试剂盒的灵敏度,降低试剂盒的检测下限,可以达到良好的稳定性;并显著降低试剂盒的本底;

 

实验流程:

 

 

实验数据:

Human TRANCE/RANK L/TNFSF11 Catalog Number: DY626)为例:

以RND duoset 为例,试剂盒示例数据 VS BioTNT包被经济套餐3+RND duoset

 

 

检测下限(pg/ml)(更低的检测下限代表试剂盒灵敏度更高,性能更好):

价格对比(5块板):

 

 

 

 

订购信息:

EL-CPX-5,ELISA包被经济套餐3(5块板), 可用于5块板ELISA 包被;可适用于RND duoset 5块板的配套包被使用;适用于anogen 5块板的配套包被使用;适用于adipogen 5块板的配套包被使用;

EL-CPX-10,ELISA包被经济套餐3(10块板),可用于10块板ELISA 包被,可适用于anogen 10块板的配套包被使用;可适用于antigenix 10块板的配套包被使用;

EL-CPX-15, ELISA包被经济套餐3(15块板),可以用于15块板ELISA 包被,可适用于RND duoset 15块板的配套包被使用;

 

产品包装如下:

 

产品编号

产品名称

EL-CPX-5

EL-CPX-10

EL-CPX-15

EL-CPX01

coating buffer 包被缓冲液

15ml(10X)

30ml(10X)

50 ml (10X

EL-CPX02

Nunc 单条可拆酶标板maxisorp

5个/包

10个/包

15个/包

EL-CPX03

酶标板稳定剂

100ml(即用型)

200ml(即用型)

300ml(即用型)

EL-CPX08

标准品稀释液和血清样品稀释液

50ml

50ml

50ml

EL-CPX04

生物素(Biotin)稀释液

25ml

50ml

75ml

EL-CPX05

HRP耦联物保护剂/稳定稀释液

50ml

100ml

150ml

EL-CPX06

显色液A,B(Substrate   A,B)

30ml(各1瓶)

60ml(各1瓶)

100(各1瓶)

EL-CPX07

终止液(Stop Solution)

50ml(即用型)

100ml(即用型)

150ml(即用型)

 

 使用举例:

Human TRANCE/RANK L/TNFSF11 Catalog Number: DY626)为例:

如果客户购买RND systems的duoset 未包被ELISA kit,试剂盒提供:CaptureAntibody (1 vial) ,Detection Antibody (1 vial) ,Standard,Streptavidin-HRP (1 vial);  

BioTNT 提供的ELISA包被经济套装3  EL-CPX提供了包被需要的绝大多数试剂;经测试,比原试剂盒提供的缓冲液配方可以显著提高试剂盒的灵敏度,结合冻干工艺,可以达到良好的稳定性;并显著降低试剂盒的本底;

 

成分货号

内容

BioTNT 包被产品特点

R公司产品

 DY008产品成分

EL-CPX01

coating buffer 包被缓冲液

经典配方,适用于双抗夹心法的一抗包被;

137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 8.1 mM Na2HPO4, 1.5 mM KH2PO4, pH   7.2-7.4, 0.2 μm filtered (R&D Systems®, Catalog # DY006).

EL-CPX02

Nunc 单条可拆酶标板maxisorp

提供高灵敏nunc 酶标板(maxisorp),单孔可拆,灵敏度高;

DY99096孔板

EL-CPX03

酶标板稳定剂

可与国外原装酶标板稳定剂相媲美,上百次实验验证;可以集blocking和酶标板稳定于一步。

Biotnt 提供的酶标板稳定剂可以给您两方面的帮助:

1. 封闭非特异性和未结合的位点,减少实验背景;

2.稳定被固定的生物分子,改善测试试剂盒的货架寿命;

Reagent Diluent: 1% BSA in PBS, pH   7.2-7.4, 0.2 μm filtered (R&D Systems®, Catalog # DY995)

EL-CPX08

标准品稀释液和血清样品稀释液

biotnt提供的样品稀释液同时可用于标准品的稀释,可以降低零孔的本底; 用PBS 来代替时,本底会升高;

采用Reagent Diluent,配方同上。与血清并不类似

EL-CPX04

生物素(Biotin)稀释液

可稳定保存biotin 抗体,用PBS 来代替时,biotin 溶液不够稳定;

采用Reagent Diluent,配方同上。没有稳定作用

EL-CPX05

HRP耦联物保护剂/稳定稀释液

1.     HRP耦联物保护剂/稳定稀释液产品特点:

  提高信燥比:可提高免疫实验的敏感度,降低背景;

  提高了实验的可重复性;

Biotnt提供的HRP耦联物保护剂,可把几万倍的HRP浓缩液用HRP耦联物保护剂/稳定稀释液稀释至100×或者20×,并在4度稳定保存半年,可稀释HRP浓缩液为即用型,方便日常实验的使用。

2.   采用Reagent Diluent,配方同上。 PBS 或者reagent diluent来代替时,稳定性不好,本底升高,实验的灵敏度降低;

EL-CPX06

显色液A,B(Substrate A,B)

优点:

1.稳定性好:室温储存12个月;2-8度至少24个月;

2.安全性好:不含有害溶剂,如DMF或者DMSO;

3.双组分, 灵敏度极高;

4.批间差小,背景低,效率高;

TMB A, B (R&D Systems®,   Catalog # DY999)

EL-CPX07

终止液(Stop Solution)

经典终止液配方2 N H2SO4

2 N H2SO4 (R&D Systems®, Catalog # DY994)

 

可以BIOTNT ELISA 辅助试剂中找到其他ELISA 需要使用到的产品:

品名

货号

品牌

规格

用途

封板膜(plate sealer)

EL-CPI05-01

BioTNT

1大张

可以剪裁后用于板的密封

酶标板自封铝箔袋+干燥剂

EL-CPI05-20

BioTNT

20个自封袋+40个干燥剂

包被板的密封,干燥,稳定

样品稀释液:非血清样品

EL-CPV03-100

BioTNT

100ml

用来稀释细胞上清样品或其他非血清样品

ELISA 洗涤液(20X)

EL-00402-250

BioTNT

250ml

包被过程和实验过程中用于洗板;如果对实验要求不高,可以用PBS(EL-00402)代替;

PBS (缓冲液干粉

P1010-2L

BioTNT

2L

可用来配制2L PBS 的干粉

 更多产品见ELISA reagents  产品目录;http://www.biotnt.com/product/ELISA-Reagents.aspx

 

 

品名 货号 特性 品牌 规格 价格
PBS缓冲液干粉 P1010-2L BioTNT 2L ¥10
¥8
ELISA包被经济套餐3(5块板) EL-CPX-5 BioTNT 可用于5块板的包被 ¥980
¥750
ELISA包被经济套餐3(15块板) EL-CPX-15 BioTNT 可用于15块板的包被 ¥2070
¥1590
ELISA包被经济套餐3 (10块板) EL-CPX-10 BioTNT 可用于10块板的包被 ¥1460
¥1125
酶标板稳定剂 EL-CPX03-500 BioTNT 500ml(即用型) ¥910
¥700
酶标板稳定剂 EL-CPX03-250 BioTNT 250ml(即用型) ¥520
¥400
酶标板稳定剂 EL-CPX03-125 BioTNT 125ml(即用型) ¥320
¥250
Nunc 单条可拆酶标板maxisorp EL-CPX02-60 BioTNT 60个/箱 ¥1560
¥1200
coating buffer 包被缓冲液(10X) EL-CPX01-250 BioTNT 250ml(10X) ¥460
¥350
coating buffer 包被缓冲液(10X) EL-CPX01-125 BioTNT 125ml(10X) ¥260
¥200
HRP耦联物保护剂/稳定稀释液 EL-CPV05-500 BioTNT 500ml ¥1560
¥1200
HRP耦联物保护剂/稳定稀释液 EL-CPV05-250 BioTNT 250ml ¥910
¥700
HRP耦联物保护剂/稳定稀释液 EL-CPV05-125 BioTNT 125ml ¥520
¥400
HRP耦联物保护剂/稳定稀释液 EL-CPV05 BioTNT 50ml ¥280
¥212
生物素(Biotin)稀释液 EL-CPV04-50 BioTNT 50ml ¥390
¥300
生物素(Biotin)稀释液 EL-CPV04-250 BioTNT 250ml ¥1300
¥1000
生物素(Biotin)稀释液 EL-CPV04-25 BioTNT 25ml ¥260
¥200
生物素(Biotin)稀释液 EL-CPV04-125 BioTNT 125ml ¥780
¥600
样品稀释液:用来稀释细胞上清样品或其他非血清样品 EL-CPV03-500 BioTNT 500ml ¥460
¥350
样品稀释液:用来稀释细胞上清样品或其他非血清样品 EL-CPV03-250 BioTNT 250ml ¥260
¥200
样品稀释液:用来稀释细胞上清样品或其他非血清样品 EL-CPV03-1000 BioTNT 500mlx2 ¥840
¥650
样品稀释液:用来稀释细胞上清样品或其他非血清样品 EL-CPV03-100 BioTNT 100ml ¥120
¥90
样品稀释液:直接用来稀释血清样品 EL-CPV02-500 BioTNT 500ml ¥460
¥350
样品稀释液:直接用来稀释血清样品 EL-CPV02-250 BioTNT 250ml ¥260
¥200
样品稀释液:直接用来稀释血清样品 EL-CPV02-1000 BioTNT 500mlx2 ¥840
¥650
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Biotnt 提供以下标本代测服务和ELISA包被服务:


1、 预包被试剂盒的查找和代测服务:Biotnt 提供以下品牌如美国AntigenixADIBiolegend,Crystalebioscience monobindpheonixpeptideRaybiotechRndsystemsZeus scentific, 德国LDN, DRG, domesticIBL, 日本shibayaji,瑞典Mercordia, 加拿大Anogen,等国际著名ELISA品牌的试剂盒代购和实验代测服务;更多可靠品牌可以查询,并咨询相应地区销售负责人;

 

2 BioTNT 推出RND duoset试剂盒的包被和检测服务:

您在RND Systems 官网查询到的duoset 试剂盒,由biotnt 代购 或者由客户自己提供,biotnt 进行包被和代测服务,仅收取1000元/板的技术服务费,每板可以进行80个样品的单孔检测;

举例:

购买:

Human Angiopoietin-2 DuoSet, 15 Plate 货号:DY623

可进行15块板的包被和检测; 费用仅需:8440+15000=23440;

合计:每块板的费用为:1563元;

优点:可以用RND 品牌发表文章,发表文章时materials:Human Angiopoietin-2 DuoSet, Biotnt construct pack I and Biotnt construct pack II;

BioTNT 技术中心多年ELISA 实验经验,保证您获得可靠的实验数据;

 

3BioTNT 推出ebioscience ELISA Ready-SET-Go!®的包被和检测服务;

您在ebioscience官网查询到的ELISA Ready-SET-Go!®试剂盒,由biotnt 代购 或者由客户自己提供,biotnt 进行包被和代测服务,单块板收取1500/板的技术服务费,包括试剂盒的购买费用;每板可以进行80个样品的单孔检测;

举例:

购买:

Human IL-10 ELISA Ready-SET-Go!® 货号:88-7106

每块板的费用仅需要1500元;

优点:可以用ebiosceince 品牌发表文章,发表文章时materials:Human IL-10 ELISA Ready-SET-Go!®; 货号:88-7106 ;Biotnt construct pack I and Biotnt construct pack II;

BioTNT 技术中心多年ELISA 实验经验,保证您获得可靠的实验数据;

 

4、BioTNT 推出antigenix ELISA construction kit的包被和检测服务;

您在antigenix官网查询到的ELISA construction kit 试剂盒,由biotnt 代购 或者由客户自己提供,biotnt 进行包被和代测服务,仅收取1000元/板的技术服务费,每板可以进行80个样品的单孔检测;

举例:

购买:

Mouse IL 1 Beta Construction Kit; 货号:RMF120CK

可进行10块板的包被和检测; 费用仅需:6500+10000=16500;

合计:每块板的费用为:1650元;

优点:可以用antigenix 品牌发表文章,发表文章时materials:Mouse IL 1 Beta Construction Kit; 货号:RMF120CK ;Biotnt construct pack I and Biotnt construct pack II;

BioTNT 技术中心多年ELISA 实验经验,保证您获得可靠的实验数据;

 

5、BioTNT 推出Biolegend ELISA 未包被板的包被和检测服务;

您在biolegend 官网查询到的ELISA construction kit 试剂盒,由biotnt 代购 或者由客户自己提供,biotnt 进行包被和代测服务,仅收取1000元/板的技术服务费,每板可以进行80个样品的单孔检测;

举例:

购买:human IFN gamma ELISA 5块板,未包被包装;

可进行5 块板的包被和检测; 费用仅需:4000+5000=9000;

合计:每块板的费用为:1800元;

优点:可以用Biolegend 品牌发表文章,发表文章时materials:human IFN gamma ELISA ;Biotnt construct pack I and Biotnt construct pack II;

BioTNT 技术中心多年ELISA 实验经验,保证您获得可靠的实验数据;

 

以上所有检测服务,如果不需要,仅需要提供包被服务,价格相同;包被板可以稳定6个月(包被质量依赖于capture 抗体的质量)

 

6、 Biotnt 同时提供可与原装进口媲美的ELISA Construction Pack, 方便客户进行ELISA 实验;

7、Biotnt 提供更多的ELISA developing 试剂,方便您进行ELISA的科研和生产;

8、Biotnt 提供抗体选择咨询:依据多年的ELISA实验经验和严禁的实验态度,Biotnt 愿与您探讨ELISA抗体的选择和购买;

9、 对于客户提供的一抗和二抗,标准品进行试剂盒研发,收取3000元/每个项目的研发费用;

10、 ELISA 辅助服务:如果客户提供的是固体样本,如组织或细胞,需要Biotnt 进行组织匀浆或细胞裂解,提蛋白,以及蛋白定量;这一步需要收取费用;


ELISA 样本:

    建议客户提供液体标本进行ELISA检测,如血清,抗凝血浆,细胞上清,其他生物学体液;如客户的样本为组织或者细胞等非液体样本,需要进行样本的预处理;客户可以自己对样本进行预处理,如组织的匀浆,然后测定蛋白含量;细胞样本进行细胞裂解液制备后,也需要进行蛋白定量;蛋白定量请采用Bradford 法或者BCA法进行。

 

 


注意事项及说明:

Ø  上述试剂均可2-8℃保存,保质期为一年;其中终止液可以室温或低温保存;

Ø  试剂如储存时间较久,请在正式实验前进行预实验验证试剂质量;

Ø  显色液B液需避光保存;

Ø  酶标板稳定剂经0.2um过虑,含非汞防腐剂以抑制保存过程中微生物繁殖;

Ø  为了您的安全和健康,请穿实验服并戴防护手套操作。


试剂使用说明和包被实验示例:

一、包被液的配制:

coating buffer 包被缓冲液(EL-CPI01):该试剂为10X 浓缩液,使用前请根据实验用量,用蒸馏水稀释至1X,即配即用,例:10ml coating buffer + 90ml蒸馏水;

 Coating buffer 用于抗体的包被;可替代以PBS为主的包被液体;请用1* coating  buffer和适量抗体配成包被液,抗体浓度请参考抗体的说明。


二、包被实验示例:

ELISA酶标板(EL-CPI02中每孔加入100ul包被液(包被液若有剩余可多包被一点,以条为单位),在板上贴膜,室温(控制室温在25,板放置处旁放置温度计控温)温育过夜(下午4点到第二天早上9点,不宜缩短时间,会降低包板效率);结束温育(也请参考抗体说明书的包被条件进行相应调整)。多余的配好的包被液不能保存。


三、洗板封闭:

1)        洗液20×Wash BufferEL-00402(可以用PBS +Tween 20代替)配制成1×Wash Buffer(实验前请合理计算用量,配制成足够的量待用),用1×Wash Buffer洗板4次(注:包被组分在加稳定剂前不能剧烈震荡或完全干燥,所以洗板过程需快速、温和,不要拼命拍板);

2)        洗板后立即加入200ul每孔的酶标板稳定剂(EL-CPI02),37温育1小时;

3)        弃掉或吸取酶标板稳定剂(注:拍干,千万不要洗板)。


封闭好的酶标板可以有以下几种处理方式。

方式一:直接进行检测。


方式二:

1)   冻干成品:把酶标板放入冰箱,-20℃冰箱冷冻过夜。

2)   调试真空冻干机,立即将冷冻过夜的酶标板放入真空冻干机冻干24小时;

3)   取出冻干的酶标板,立即将酶标板放入一个装有干燥剂(EL-CPI06)的铝箔袋内(EL-CPI05),贴上标签,放4℃冰箱长期保存。(冻干同时可进行标准品冻干)。


方式三:室温晾干

按照以下方法晾干长期保存:

1)   室温或者 37°C ;

2)   湿度: 最好在一个湿盒中(小于 15% 湿度);

3)    时间: 2-24 小时,晾干;确认干燥

4)   立即将将经过稳定剂处理的产品封装在一个含有干燥剂(EL-CPI06)的密闭防潮容器中,正确使用干燥剂包装是长期保存的关键。

注意:如果酶标板不直接进行检测,必须采用方式二或者方式三,进行干燥。干燥后的酶标板才可以稳定保存。


四、检测方法示例

(请参考抗体说明,安排相应的检测方法,根据您的实验路线,如果是双抗夹心法,可以选择酶标二抗,也可以选择生物素二抗,采用生物素-亲和素的放大系统):

实验示例:下面是双抗夹心法的实验示例: 

1)        以上的酶标板已经预包被了抗体,选取相应的板条;

2)        标准品请用相应的稀释液稀释;如检测的是血清,标准品用EL-CPV02稀释;如果检测的是细胞上清样品或其他非血清样品,请用EL-CPV03稀释;

3)        酶标板中加入适量稀释好的标准品和样品,各100ul

4)        37度温育12小时;

5)        洗板四次(洗液同上);

6)        生物素二抗请根据说明书,用生物素(Biotin)稀释液(EL-CPV04)进行稀释;

7)        37度温育30分钟;

8)        洗板四次;

9)        酶标二抗,请用(EL-CPV05)稀释;

10)     每孔加入100ul 稀释好的酶标二抗,37度温育1小时或其他时间;

11)     洗板四次;

12)     加入显色液:显色液ABSubstrate AB)(EL-CPI03);使用前请按按照A液和B11比例充分混匀,方可使用,使用前15分钟配置;每孔加入50ul-100ul混合后的显色液;室温温育10-30分钟:显色时间根据目测最高浓度标准品的颜色,应为深蓝色,630读数,OD 值应在0.7以上;

13)     加入终止液(Stop Solution)(EL-CPI04100ul 每孔。

加入终止液50ul-100ul,显色从蓝色转为黄色。建议采用450-630的双波读数。

 

注:根据实验设计不同的包被浓度,酶标二抗浓度,HRP浓度,反应时间等变量,找到最优化的实验条件。确定试剂盒定量范围、灵敏度等试剂盒特性。

双抗夹心法可以回归为线性、二次曲线,或者四参数曲线;

竞争法可以回归为log-logit,或者四参数曲线;


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