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BioTNT ELISA包被经济套餐3 (10块板)
    产品中心    >>  试剂    >>  检测试剂盒    >>  ELISA辅助试剂 关   闭
ELISA包被经济套餐3 (10块板)
分类:ELISA辅助试剂
品牌:BioTNT
货号:EL-CPX-10
原价:1460
现价:¥1125.00    节省:¥335
规格:可用于10块板的包被
产品参数

--------------------------------------点击查看《产品说明书》--------------------------------------



ELISA包被套餐3     ELISA Construction Pack X使用说明书

Version 2.0

catEL-CPX-5

catEL-CPX-10

catEL-CPX-15

试剂清单:

产品编号

产品名称

EL-CPX-5

EL-CPX-10

EL-CPX-15

EL-CPX01

coating buffer 包被缓冲液

15ml10X

30ml10X

50 ml (10X

EL-CPX02

Nunc 单条可拆酶标板maxisorp

5/

10/

15/

EL-CPX03

酶标板稳定剂

100ml(即用型)

200ml(即用型)

300ml(即用型)

EL-CPX08

标准品稀释液和血清样品稀释液

50ml

50ml

50ml

EL-CPX04

生物素(Biotin)稀释液

25ml

50ml

75ml

EL-CPX05

HRP耦联物保护剂/稳定稀释液

50ml

100ml

150ml

EL-CPX06

显色液ABSubstrate AB

30ml(各1瓶)

60ml(各1瓶)

100(各1瓶)

EL-CPX07

终止液(Stop Solution

50ml(即用型)

100ml(即用型)

150ml(即用型)

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

其他需要使用但试剂盒并未提供的材料:

1.  一抗,生物素二抗,标准品,HRP-Strepavidin 浓缩液;

2.  封板膜(Plate sealer),有粘性,贴在板上,用于板的密封,防止异物跌落在板孔内;货号:EL-CPX08

3.  ELISA 洗涤液,货号EL-00402,用于洗板;

4.  PBS缓冲液(phosphate buffered solution)即磷酸盐缓冲液,能够提供相对稳定的离子环境和pH缓冲能力,是生物学中经常使用的缓冲盐溶液。pH 7.2-7.4,主要成分为磷酸二氢钠、磷酸氢二钠以及氯化钠,常用于分子克隆及免疫组化等实验可稀释成1×PBS,可以替代样品稀释液等组分;也可加tween20成为自配的洗涤液;

5.  EL-CPI05-20,自封铝箔袋,干燥剂;

 

注意事项及说明:

Ø  上述试剂均可2-8℃保存,保质期为一年;其中终止液可以室温或低温保存;

Ø  试剂如储存时间较久,请在正式实验前进行预实验验证试剂质量;

Ø  为了您的安全和健康,请穿实验服并戴防护手套操作。

 

 

 

试剂盒使用说明和包被实验示例:

一、包被液的配制:

coating buffer 包被缓冲液(EL-CPX01):该试剂为10X 浓缩液,使用前请根据实验用量,用蒸馏水稀释至1X,即配即用,例:10ml coating buffer + 90ml蒸馏水;

 Coating buffer 用于抗体的包被;可替代以PBS为主的包被液体;请用1* coating  buffer和适量一抗配成包被液,抗体浓度请参考抗体的说明。

 

二、包被实验示例:

ELISA酶标板(EL-CPX02中每孔加入100ul包被液(包被液若有剩余可多包被一点,以条为单位),在板上贴膜(封板,plate sealer,),室温(控制室温在25℃,板放置处旁放置温度计控温)温育过夜(下午4点到第二天早上9点,不宜缩短时间,会降低包板效率);结束温育(也请参考抗体说明书的包被条件进行相应调整)。多余的配好的包被液不能保存。

 

三、洗板封闭:

1)        洗液20×Wash BufferEL-00402(可以用PBS +Tween 20代替)配制成1×Wash Buffer(实验前请合理计算用量,配制成足够的量待用),用1×Wash Buffer洗板4次(注:包被组分在加稳定剂前不能剧烈震荡或完全干燥,所以洗板过程需快速、温和,不要拼命拍板);

2)        洗板后立即加入200ul每孔的酶标板稳定剂(EL-CPX03),37℃温育1小时;

3)        弃掉或吸取酶标板稳定剂(注:拍干,千万不要洗板)。

封闭好的酶标板可以有以下几种处理方式。

方式一:直接进行检测。

方式二:冻干(需有冻干机,长期保存)

1)   冻干成品:把酶标板放入冰箱,-20℃冰箱冷冻过夜。

2)   调试真空冻干机,立即将冷冻过夜的酶标板放入真空冻干机冻干24小时;

3)   取出冻干的酶标板,立即将酶标板放入一个装有干燥剂的铝箔袋内(EL-CPI05-20),贴上标签,放4℃冰箱长期保存。(冻干同时可进行标准品冻干,标准品冻干需要购买标准品冻干液)。(干燥剂和铝箔袋可以单独订购)

方式三:室温晾干(无需冻干机)

按照以下方法晾干长期保存:

1)   室温或者 37°

2)   湿度最好在一个湿盒中(小于 15% 湿度)

3)    时间: 2-24 小时,晾干;确认干燥

4)   立即将将经过酶标板稳定剂处理的产品封装在一个含有干燥剂(EL-CPI05-20)的密闭防潮容器中,正确使用干燥剂包装是长期保存的关键。干燥密封的酶标板可以放置半年以上。

注意:如果酶标板不直接进行检测,必须采用方式二或者方式三,进行干燥。干燥后的酶标板才可以稳定保存。

方式四:短期使用:

如果短期内使用,可以把酶标板放入冰箱,-20℃冰箱冷冻。在使用前一直冷冻在-20度,可以短期保存(酶标板上包被的抗体效价降低很慢)(半个月内使用可以采用本方法)。冷冻后的酶标板放入含干燥剂的酶标板自封袋中,短期保存(半个月内使用)

 

四、检测方法示例

(请参考抗体说明,安排相应的检测方法,根据您的实验路线,如果是双抗夹心法,可以选择酶标二抗,也可以选择生物素二抗,采用生物素-亲和素的放大系统):

实验示例:下面是双抗夹心法的实验示例: 

1)        以上的酶标板已经预包被了抗体,选取相应的板条;

2)        标准品请用相应的稀释液稀释;如检测的是血清,标准品用EL-CPX08稀释;如果检测的是细胞上清样品或其他非血清样品,请用EL-CPV03稀释;(本套餐中仅提供一种稀释液,如需另外一种,请单独订购)

3)        酶标板中加入适量稀释好的标准品和样品,各100ul

4)        37度温育12小时;

5)        洗板四次(洗液同上);

6)        生物素二抗请根据说明书,用生物素(Biotin)稀释液(EL-CPX04)进行稀释;

7)        37度温育30分钟;

8)        洗板四次;

9)        HRP 酶联物,请用(EL-CPX05)稀释;

10)     每孔加入100ul 稀释好的HRP 酶联物,37度温育1小时或其他时间;

11)     洗板四次;

12)     加入显色液:显色液ABSubstrate AB)(EL-CPX06);使用前请按按照A液和B11比例充分混匀,方可使用,使用前15分钟配置;每孔加入50ul-100ul混合后的显色液;室温温育10-30分钟:显色时间根据目测最高浓度标准品的颜色,应为深蓝色,630读数,OD 值应在0.7以上;

13)     加入终止液(Stop Solution)(EL-CPX07100ul 每孔。

加入终止液50ul-100ul,显色从蓝色转为黄色。建议采用450-630的双波读数。

 注:根据实验设计不同的包被浓度,酶标二抗浓度,HRP浓度,反应时间等变量,找到最优化的实验条件。确定试剂盒定量范围、灵敏度等试剂盒特性。

双抗夹心法可以回归为线性、二次曲线,或者四参数曲线;

竞争法可以回归为log-logit,或者四参数曲线;

 

您可能会用到的其他包被产品:见网页

品名

货号

品牌

规格

用途

封板膜(plate sealer

EL-CPX08-01

BioTNT

1大张

可以剪裁后用于板的密封

酶标板自封铝箔袋+干燥剂

EL-CPI05-20

BioTNT

20个自封袋+40个干燥剂

包被板的密封,干燥,稳定

样品稀释液:非血清样品

EL-CPV03-100

BioTNT

100ml

用来稀释细胞上清样品或其他非血清样品

ELISA 洗涤液(20X

EL-00402-250

BioTNT

250ml

包被过程和实验过程中用于洗板;如果对实验要求不高,可以用PBSEL-00402)代替;

PBS缓冲液干粉

P1010-2L

BioTNT

2L

可用来配制2L PBS 的干粉

 

 
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