产品简介：

Ø  碱性条件下，蛋白将Cu²⁺还原为Cu⁺， Cu⁺与BCA试剂形成紫蓝色的络合物，测定其在562nm处的吸收值，并与标准曲线对比，即可计算待测蛋白的浓度。常用浓度的去垢剂SDS，Triton X-100，Tween不影响检测结果，但受螯合剂(EDTA，EGTA)、还原剂（DTT，巯基乙醇）和脂类的影响。实验中，若发现样品稀释液或裂解液本身背景值较高，可试用Bradford蛋白浓度测定试剂盒。

保存条件：

Ø  试剂盒，室温保存，12个月。

Ø  标准品，-20℃保存，12个月。

注意事项：

Ø  长期不用时，Cu试剂与PBS稀释液可置于2-8℃保存，如发现细菌污染则应丢弃。BCA试剂在低温条件下出现结晶沉淀时，可37℃温育使其完全溶解, 不影响使用；

Ø  样品中若含有较多干扰物质时，请采用Bradford蛋白浓度测定试剂盒；

Ø  为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：

一、微孔酶标仪法:

1)      配制工作液: 根据标准品和样品数量，按50体积BCA试剂加1体积Cu试剂（50:1）配制成BCA工作液，充分混匀(混合时可能会有浑浊，但混匀后就会消失)。BCA工作液室温24小时内稳定；

2)      稀释标准品：取10微升BSA标准品用PBS稀释至100微升（样品一般可用PBS稀释），使终浓度为0.5mg/ml。将标准品按0, 2, 4，6，8, 12, 16, 20微升加到96孔板的蛋白标准品孔中，加PBS补足到20微升。

3)      将样品作适当稀释（最好多做几个梯度，如作2倍、4倍、8倍稀释），加20微升到96孔板的样品孔中。由于移液器在取小量时的误差，标准线前面的点可能不很准确，所以尽可能的让样品点落在标准线1/2后。

4)      各孔加入200微升BCA工作液，37℃放置15-30分钟。用酶标仪测定A562nm，根据标准曲线计算出蛋白浓度。使用温箱孵育时，应注意防止因水分蒸发影响检测结果。

二、分光光度计法:

1)      配制工作液: 根据标准品和样品数量，按50体积BCA试剂加1体积Cu试剂（50:1）配制成BCA工作液，充分混匀(混合时可能会有浑浊，但混匀后就会消失)。BCA工作液室温24小时内稳定；

2)      稀释标准品：取100微升BSA标准品用PBS稀释至1ml（样品一般可用PBS稀释），使终浓度为0.5mg/ml；

3)      取八支（或者更多）5ml离心管，标上号，按下表加入试剂。在室温或不超过37℃的水浴中溶解SDS-PAGE上样缓冲液(5X)。水浴溶解后立即室温存放，尽量避免长时
   间置于水浴中。
2. 按照每4微升蛋白样品加入1微升蛋白上样缓冲液(5X)的比例，混合蛋白样品和蛋白上样缓冲液(5X)。
3. 100℃或沸水浴加热3-5分钟，以充分变性蛋白。
4. 冷却到室温后，直接上样到SDS-PAGE胶加样孔内即可。
5. 通常电泳至蓝色染料到达胶的底端处附近即可停止电泳。SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(5X)中含少量DTT和巯基乙醇，有轻微刺激性气味。
    SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(5X)必须完全溶解后再使用。
    为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作

4)      37℃放置15-30分钟。用分光光度计测562nm处吸光值，根据标准曲线计算出蛋白浓度