设计原则：

1.根据ncbi的基因库（https://www.ncbi.nlm.nih.gov/gene/）进行搜索mRNA序列，进行引物设计。

2.使用blast比对不同转录本，选择同源区段进行设计，确保引物扩增的区域能够识别所有转录本。

3.引物长度在60-150bp之间。

4.引物对符合qPCR实验的原则。

5.引物对尽量采用相同或类似的退火温度，以确保与biotnt的其他qPCR引物能够使用相同的实验条件进行qPCR实验。qPCR引物可以转换为qPCRarray引物进行使用。

6.如果无法用于全同源区段，将进行特殊说明，或舍弃一到两个ncbi预测转录本（以xm开头的序列）。未说明的，均为针对转录本的全同源区段。

7.由于需要检测全同源区段，而ncbi数据库更新频率较高，因此我们的设计原则不包括跨外显子这一项。客户使用我们的引物时，需要在抽提时严格去除基因组，以确保数据的特异性。

 

订单流程：

1.购买：当您需要人、大鼠和小鼠三个种属的mRNA引物，且在商城小程序中搜索不到相应产品时，请提交定制订单。每个指标计为1个订单，如果要定3个指标，则在订单中输入数量为3，价格为139一套，3套的价格为417。

2.提交订单时，请联系客服并提供订单指标的种属基因名和基因ID，以逗号进行间隔；不同指标之间以分号进行间隔。
例如：如果您要订购3个syt4的引物，请将订单留言为：human syt4（6860）；mousesyt4（20983）；rat syt4（64440）。
请注意，syt4是官方名，尽可能提供详细的官方名和基因ID，以便我们快速执行订单。如果您不清楚官方名称或基因ID，请联系我们的客服，我们会帮助您查找和确认。

3.biotnt技术部收到订单后，会根据基因进行设计，设计原则如上所述。设计的引物将输出引物序列、产物长度、产物Tm值和上下游Tm值等信息。

4.引物合成后，将在biotnt实验室使用thermofisher的QS3、biotntqPCR premix（染料法）（货号：A2010A0001）以及biotnt自产的阳性模板（人、大鼠、小鼠）中验证引物。

5.当验证结果为S型扩增曲线，产物Tm值与设计的Tm值相差不超过2度时，可以认定为特异性通过，引物验证合格可以出库。

6.出库的产品为上下游引物各1支，浓度为10uM，体积为200ul。可用于qPCR实验20ul体系500次作为1个标准包装。

7.实验使用的说明书与mRNAprimer pairs相同。

8.小程序查找引物，输入基因名称或者基因ID