5X蛋白上样缓冲液是一种常用于SDS-PAGE电泳的试剂，通常含有溴酚蓝作为染料，以及DTT（二硫苏糖醇）和β-ME（β-巯基乙醇）等还原剂。这些还原剂可以使蛋白质分子的链内二硫键和链间二硫键断裂，使通过二硫键连接的各蛋白亚单位彼此分离，从而在电泳凝胶上显现清晰蛋白条带。

此外，某些特殊的5X蛋白上样缓冲液还添加了安全无毒的特殊荧光染料，如InstantView™ SDS-PAGE蛋白染色及上样缓冲液（5X），它能使蛋白在上样前与上样缓冲液的煮沸过程中被染色成紫色并带上橙黄色荧光，便于直接肉眼观察或使用紫外或蓝光设备观察蛋白的条带。

使用这种缓冲液时，通常需要先在室温或不超过37℃的水浴中溶解，然后按照每4μl蛋白样品加入1μl蛋白上样缓冲液（5X）的比例混合。混合后，通过100℃或沸水浴加热3~5分钟使蛋白变性，冷却到室温后，即可直接上样到SDS-PAGE胶加样孔内。

请注意，由于蛋白上样缓冲液中含有少量DTT，可能会有轻微剌激气味，建议在通风厨内操作，并佩戴一次性手套。另外，刚从冷冻保存中取出的缓冲液可能会出现SDS的沉淀，这时可以在温水中溶解后使用。