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BioTNT Realtime PCR PreMIX(低ROX sybgreen) (适…
    产品中心    >>  试剂    >>  分子生物学试剂    >>  qPCR kits & 核酸抽提 关   闭
Realtime PCR PreMIX(低ROX sybgreen) (适用低ROX和无ROX仪器)
分类:qPCR kits & 核酸抽提
品牌:BioTNT
货号:A2010A011
原价:170
现价:¥129.00    节省:¥41
规格:1ml(100T)
产品参数

--------------------------------------点击查看《产品说明书》--------------------------------------



 

Realtime PCR PreMIX(低ROX

(适用低ROX和无ROX仪器)  

货 号

规 格

A2010A011

1mL PCR mix1mL DEPC

A2010A011×5

5X1mL PCR mix5X1mL DEPC  

说明书

1

 

产品介绍

本产品含有优化浓度的Fast HSTaq DNA PolymeraseSYBR Green I dNTPs Mg2+、 反应缓冲液和稳定剂等成分。Fast HSTaq DNA Polymerase 高温加热前,抗 Taq 单克隆抗体与 Taq 结合, 抑制 Taq 的聚合酶活性,从而抑制在低温条件下出现的由引物和模板 DNA 非特异性杂交或引物二聚体引起的非特异性扩增。 抗体在 PCR 反应的预变性步骤中已完全失活,不会阻碍之后 Taq 酶聚合反应,大大提高了 PCR 反应的灵敏度及特异性。优化浓度的 SYBR Green I 荧光染料掺入 DNA 双链后,荧光信号增强,而不掺入链中 SYBR Green I 染料分子荧光信号不变, 从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步,荧光可以在退火或延伸阶段测定。

 本产品为 2×浓度预混实时荧光定量快速 PCR 反应体系(含 Low ROX),使用时只需加入模板、引物和水,使其工作浓度为 1×,即可进行反应。具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好等优点,可最大限度地减少人为误差、节约 PCR 实验操 作时间、降低污染几率。

使用说明

1)    从冰箱中取出本产品,室温融化后轻轻震荡混匀,1000rpm简短离心1015秒。

2)    qPCR反应体系配制:

qPCR反应体系

体积 (μL)

终浓度

备注

qPCR Premix(2X)

10

 

BioTNT A2010A011

上游引物(10μM)

0.4

0.2μM

可由引物初始浓度调整

下游引物(10μM)

0.4

0.2μM

可由引物初始浓度调整

样本cDNA/阳参/阴参

1

 

待检样品

RNase-free

5

 

补足总体积20μL

总体积

20

 

 

50-μL PCR 反应体系下推荐,0.5–500ng基因组DNA1pg–50ng质粒或环状DNA1–20ng cDNA

3)    使用本产品进行qPCR实验可广泛应用在市场现存的以下各种qPCR仪器:

不需要ROX校正的仪器:Roche LightCycler 480Roche LightCyler 96Bio-rad iCyler iQiQ5CFX96等。请在分析的时候 passive reference 选择None

需要Low ROX校正的仪器:ABI Prism7500/7500 FastQuantStudio 3 SystemQuantStudio 5 SystemQuantStudio 6 Flex SystemQuantStudio 7 Flex SystemViiA 7 systemStratagene Mx3000/Mx3005PCorbett Rotor Gene 3000等。请在分析的时候 passive reference 选择ROX 

需要High ROX校正的仪器:ABI Prism7000/7300/7700/7900EppendorfABI Step One/Step One Plus等。请购买biotntA2010A012 货号产品。

操作步骤

两步法反应条件*

三步法反应条件**

温度

时间

温度

时间

预变性***

95

5 minutes

95

5 minutes

40个循环

变性

95

5 seconds

95

5 seconds

退火

60

30 seconds

55

20 seconds

延伸

72

20 seconds

hold

4

hold

4

hold

* 当引物Tm值≥60℃,扩增产物<300bp时,推荐两步法反应条件;

** 当引物Tm<60℃,扩增产物>300bp时,推荐三步法反应条件;

*** mix 采用的是hot start 抗体taq酶,该酶保证了Real-Time PCR实验的特异性,并降低了实验操作难度(反应液配制时不需要在冰上操作,加样时间即使比较久,非特异性反应很少),必须有95 5分钟这一步,否则会导致后面的反应不能进行,没有信号检测出;

自备设备和试剂

1)    模板:cDNA,基因组DNA,质粒DNA,噬菌体DNA

2)    上下游引物,推荐BioTNT® Preci® mRNA qPCR Primer Pair

3)    BioTNT® Preci®  qPCR Positive Control

4)    RNase-free Water

5)    96孔或384PCR板;0.2mL 0.5mL Eppendorf管(无菌、无酶、RNase-free);

6)    移液器(10μL200μL规格)及RNase-free Tips10μL200μL的枪头);

7)    Real-Time PCR仪;13000rpm离心机;

PCR结果判断

1、  扩增曲线为s型,如下左图所示:

2、  熔解曲线为单峰,且峰的Tm值与产物理论Tm相差在±2℃以内,如下右图所示:

注:引物设计软件报告会通过计算CG含量以及序列位置得到理论Tm值,实验所得熔解曲线峰所对应的Tm值会因为仪器的不同而变化,但变化不会超过±2℃,如果相差过大,可能并不是目的基因的产物。

 运输与储存

1)    冰袋或干冰运输,收到后立即贮存于–20℃。

2)    -20℃储存, 有效期为6月。

3)    可多次冻融。不多于6次冻融。

质量标准(QC

BioTNT BALB/c小鼠核酸通用PCR阳性模板验证合格的基因引物,其适用于几乎所有BALB/c小鼠样本的PCR扩增,并且其熔解曲线呈特异性单峰,可以相当准确地显示目的基因的表达水平。如果客户的引物经本产品验证不合格,推荐您购买BioTNT引物,为您节省很多宝贵的精力和时间。

技术支持

1)    BioTNT为其所提供的技术支持质量和效率而自豪。技术支持部门在样品及检测领域及对BioTNT产品具有丰富的实践经验和充足的理论知识。如果您PCR或其它产品有问题或遇到困难,请联系我们,无需迟疑。

2)    BioTNT客户是我们产品改进和特殊应用信息的主要来源。您所提供的信息对于BioTNT的研究人员很有帮助。当您对产品性能或新的应用及新的技术有任何建议时,我们希望您能及时联系我们。

3)    有关技术支持和更多信息,请浏览www.biotnt.com或致电BioTNT技术支持部门。

BioTNT配套试剂

品 名

货 号

规 格

BioTNT® Preci® mRNA qPCR Primer Pair

PRIM1

500 test

BioTNT® Preci® qPCR Positive Control

 

20uL

RNA 极速抽提试剂盒

A2010A110

50T

TRIzol® RNA提取试剂盒

A2010A0401

50T

cDNA第一链合成RNA逆转录试剂

A2010A0601

50T

更多产品规格请登录www.biotnt.com查询

注意事项

1)    为了您的安全和健康,请穿实验服并戴防护手套操作。

2)           如需更详细信息,请向产品供应商咨询相关的材料安全数据书。

使用限制

本产品只用于分子生物学研究。不能应用于诊断、预防和治疗疾病。

 

产品可以登陆冠泰生物商城订购:请扫描以下图标。

 产品由上海冠泰生物科技有限公司提供。

 

产品咨询:sales@biotnt.com    BioTNT订阅号:
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