胰腺组织样本中trizol数据对比

Figure1 

红色扩增曲线是小鼠胰腺组织取完材，室温加trizol（浸没组织） 15分钟后（充分渗透）冻入=-80度冰箱（温度很重要）的CT值。

绿色扩增曲线是小鼠胰腺组织取完材，室温加trizol（浸没组织） 立即冻入-80度冰箱（温度很重要）的CT值。

结论：用trizol充分浸没组织样本并充分渗透组织有利于保护样本抑制RNA酶的活性，避免RNA的降解。

TRIzol

分子式为CH₂BrCH₂CH₂CL，分子量为157.44，密度1.592 g/cm³（氯仿1.48 g/cm³）无色透明的液体，不溶于水，溶于乙醇、醚及氯仿。1-溴-3-氯丙烷可以替代氯仿使溶液相分离，优点是毒性比氯仿要小，上下分相更加的清晰，对于上清的吸取更加的方便，其起到的作用也与氯仿相同，主要是：：

1、可以与TRIzol中的8－羟基喹啉共同作用，使蛋白质变性，蛋白质变性后，可通过离心沉淀去除，还可以起到抑制RNA酶的作用。

2、TRIzol试剂中含有大量的苯酚，而苯酚是微溶于水的，在分液时水相里会含有少量的苯酚，而苯酚不去除的话会破坏核酸，1-溴-3-氯丙烷就可以将水相里的苯酚去除掉。

3、样本在抽提的过程中会存在一些脂溶性杂质，1-溴-3-氯丙烷就可以起到一定的去除杂质的作用。

1-溴-3-氯丙烷（前16孔）与氯仿数据对比

1-溴-3-氯丙烷

异丙醇英文名为IPA，分子式为C3H8O，分子量60.06，无色透明液体，溶于水，也溶于醇、醚、苯、氯仿等多数有机溶剂。异丙醇属于有机溶剂，可以和RNA抢水，破坏RNA中的水化层，使RNA沉淀，还可以去除核酸中的蛋白质和多糖的污染。

异丙醇

在RNA沉淀过程中，我们已经将RNA变成固体析了出来，但是此时RNA的表面还沾有一些其他的杂质，所以我们这个时候就可以使用75%的乙醇进行清洗。由于RNA溶解性是易溶于水，不溶于有机溶剂，所以75%的乙醇既可以使RNA保持固体状态，少量的水还可以去除RNA表面的杂质，最后可以获得比较纯的RNA。

75%的乙醇（DEPC水稀释）

DEPC水用于稀释乙醇和RNA的重溶，使RNA由固体变为液体状态，为什么要使用DEPC水进行RNA的溶解呢？那是因为DEPC是一种RNA酶抑制剂，可以抑制RNA酶的活性，以便获得质量更好的RNA。

DEPC水