从全血样本中提取RNA,由于很多人是现场采样,当场分离淋巴细胞不是很方便,所以我们总结了一下,从全血中抽提RNA时样本如何采集和保存,找到了以下两种方法;
方法
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描述
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需要设备
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需要试剂
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需要经验
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试剂费用
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后期抽提
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方法1
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抗凝全血分离淋巴细胞
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离心机
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淋巴分离液
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非常有经验,取样当日就要分离
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<5元/管
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Trizol ,BioTNT磁珠RNA试剂盒
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方法2
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抗凝全血分离淋巴细胞
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离心机
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淋巴分离管
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略有经验
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25元/管
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Trizol ,BioTNT磁珠RNA试剂盒
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方法3
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抗凝全血离心血细胞加trizol
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无需设备
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trizol
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无需经验
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12元/管
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Trizol ,BioTNT磁珠RNA试剂盒
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方法4
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全血加入特殊的RNA 管
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无需设备
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无
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无需经验
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>80元/管
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可能需要特殊试剂,还需要测试
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方法一. 抗凝全血分离淋巴细胞:
全血加入抗凝管,分离淋巴细胞,
方法链接:http://www.biotnt.com/news/news_796.html;
淋巴细胞加入trizol,冻存-80度保存;
后期抽提方式: Trizol 抽提或者BioTNT 磁珠法抽提RNA;
方法二. 采用专门的淋巴细胞分离管;抗凝全血倒入淋巴细胞分离管中,离心,共分三层,吸取 PBMC 细胞层;
实验操作步骤: http://www.bio-city.net/manuals/7121011.pdf
方法三. 抗凝全血离心血细胞加trizol,实验操作步骤:http://www.biotnt.com/news/news_950.html
方法四.全血用特殊的RNA 保存试管进行保存:
相应产品:
A. Qiagen( BD 生产)PAXgene Blood RNA Tubes ,分离和纯化稳定在PAXgene Blood RNA Tubes中血液的细胞内RNA;
特点:用于采样、稳定及纯化的整合系统;RNA在18–25°C条件下可稳定多达3天;在–20°C或–70°C条件下至少稳定60个月;
由BD提供,货号762165,规格:100 tubes;价格 11000元/100管,平均 110元/管;
B. Thermofisher Tempus™ Blood RNA Tube
作用与上面的相同。
货号:4342792; 规格:50 tubes;价格:4,155.00; 平均:85元/管;
Tempus™ Blood RNA Tubes are for stabilization and isolation of total RNA from whole blood for gene expression analysis. Advantages of Tempus™ Blood RNA Tubes:
• Immediately lyse whole blood cells and stabilize RNA in a single step—no RBC lysis or proteinase K treatments required
• Freeze global gene expression profiles for up to five days at room temperature; greater than seven days at 4°C
How it works
Each Tempus™ Blood RNA Tube contains 6 mL Stabilizing Reagent. When the blood (3 mL) is drawn into the tube and mixed with this reagent, lysis occurs almost immediately. The stabilizing reagent inactivates cellular RNases and selectively precipitates RNA; genomic DNA (gDNA) while proteins remain in solution. Blood drawn into the Tempus™ Blood RNA Tube is stable for up to five days at room temperature, or minimally seven days at 4°C.