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技术宝典— 样本处理
BioTNT技术手册 03 ------ 血液样本的处理与运输

1             血液样本的用途

在本研究中,血液样本主要用于提取全基因组DNARNA,同时血浆用于蛋白检测。其中,DNA样本主要用于全基因组DNA测序和全基因组甲基化测序,RNA样本主要用于全基因组RNA测序。

 

因此,血液样本在处理时需分离血浆,剩余血细胞分为两管用于DANRNA提取。

 

2             实验材料及注意事项

采血管:  全血样本需要使用EDTA抗凝的采血管收集样品。由于会影响后续测序实验,不能使用肝素抗凝。

 

冻存管:  血浆和血细胞均需﹣80℃低温保存,由于采血管材质不耐低温容易碎裂,因此血浆和血细胞均需转入冻存管中进行保存。

 

标签所有生物样本均需采用唯一的ID进行编号,并标记于冻存管上。标签应采用耐低温防水标签,以免低温环境下脱落或被冷凝水浸泡模糊。

 

TRIzol LS使用Invitrogen 出品的TRIzol200ml

 

3             血液样本处理步骤

a.使用EDTA采血管采集全血至少10ml

b.将采血管放在离心机中,1500-2000g室温离心10-15分钟。

c.血液分层后。吸取上层血浆。由于白细胞层紧邻血浆层,因此血浆吸取时应格外小心,并留有一定剩余,不要带走白细胞。

d.下层血液样本按照1ml/样本加入3ml/Trizol的方式加入Trizol混匀;5分钟后分成两管放入﹣80℃冰箱。样本可用于抽提DNARNA。测定mRNA 含量和microRNA 含量,可用此样本抽提的总RNA 来进行。做SNP,甲基化等实验用此样本,抽提DNA

e.上层抗凝血浆存于冻存管中,置于﹣80℃保存。抗凝血浆样本可用于蛋白检测。抗凝血浆也可用于microRNA 检测。

 

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