1             血液样本的用途

在本研究中，血液样本主要用于提取全基因组DNA和RNA，同时血浆用于蛋白检测。其中，DNA样本主要用于全基因组DNA测序和全基因组甲基化测序，RNA样本主要用于全基因组RNA测序。

因此，血液样本在处理时需分离血浆，剩余血细胞分为两管用于DAN和RNA提取。

2             实验材料及注意事项

采血管:  全血样本需要使用EDTA抗凝的采血管收集样品。由于会影响后续测序实验，不能使用肝素抗凝。

冻存管:  血浆和血细胞均需﹣80℃低温保存，由于采血管材质不耐低温容易碎裂，因此血浆和血细胞均需转入冻存管中进行保存。

标签:  所有生物样本均需采用唯一的ID进行编号，并标记于冻存管上。标签应采用耐低温防水标签，以免低温环境下脱落或被冷凝水浸泡模糊。

TRIzol LS:  使用Invitrogen 出品的TRIzol（200ml）

3             血液样本处理步骤

a．使用EDTA采血管采集全血至少10ml。

b．将采血管放在离心机中，1500-2000g室温离心10-15分钟。

c．血液分层后。吸取上层血浆。由于白细胞层紧邻血浆层，因此血浆吸取时应格外小心，并留有一定剩余，不要带走白细胞。

d．下层血液样本按照1ml/样本加入3ml/Trizol的方式加入Trizol混匀；5分钟后分成两管放入﹣80℃冰箱。样本可用于抽提DNA和RNA。测定mRNA 含量和microRNA 含量，可用此样本抽提的总RNA 来进行。做SNP，甲基化等实验用此样本，抽提DNA。

e．上层抗凝血浆存于冻存管中，置于﹣80℃保存。抗凝血浆样本可用于蛋白检测。抗凝血浆也可用于microRNA 检测。