Spot系统(Affinity Optimized Short Peptide Tag)

Chromotek 特殊构建的短肽标签系统，第一个多肽特异性纳米抗体，可以同时用于捕获和检测的标签系统

ChromoTek Spot系统基本元素是Spot-多肽标记特异性抗体，可用作捕获抗体、检测抗体。

由一段12个氨基酸长度的肽链Spot-标记，和一个普适性非常广的Spot-抗体组成。

Spot-抗体上结合了Spot-标记，具有非常高的亲和力。

具体有以下4个产品：

l  Spot-Trap：

用于免疫沉淀（IP）和亲和纯化（AP）

是一种Spot抗体，结合在琼脂糖胶或者磁珠上。

l  Spot-Label：

用于免疫荧光（IF）和免疫印迹（WB）

Spot-Label是结合了荧光染料的Spot抗体，也可以用于超高倍显微镜检测。

l  Spot-Tag Vectors：

Spot-标记质粒：

用于Spot-标记蛋白的表达

Spot-标记也可以用PCR引物进行克隆

l  Spot-Peptide：

洗脱结合Spot-标记的融合蛋白，可用于spot-trap的再生和重复使用；

Spot-tag的特征和优势

关键特征：

小：12个氨基酸，1.4kDa大小；氨基酸序列：PDRVRAVSHWSS

等电点pH：10.4

亲水性

惰性

消光系数：5500L/mol/cm

关键优势：

极易克隆

N端和C端都能作用

高表达

在细菌、真菌、哺乳动物细胞系，植物和昆虫细胞中都能检测

所有好的抗体所具备的条件，Spot抗体都有：

高质量的重组蛋白

序列已知

结构稳定

蛋白结合机制简明

Spot-抗体的特征和优势

关键特征：

特点明确，性能清楚；

小： 14.7kDa，2-3nm大小

和Spot-标记有高亲和力：K_D = 0.7 nM

高化学和热力学稳定性：Tm = 65.1 ℃

无重链轻链干扰

用Spot-Peptide或变化pH洗脱

可重复利用

关键优势：

特异性高，杂背景小

恶劣条件下，稳定性好

自然洗脱和专业洗脱都行

高特异性结合蛋白

更高的分辨率

良好的样本渗透和表位结合能力

高检测限值

平行实验验证确保质量

总而言之，spot-tag 和spot-nanobody 用途多，可以同时用于捕获和检测；

相应产品有如下优点：

  Spot-Trap：

无轻链和重链污染；

恶劣的洗涤条件；

天然和非天然洗脱；

高亲和性，严格洗涤

应用： IP 和COIP;  亲和纯化；

  Spot-Label：

高分辨率和标记密度；

更好的表位获取和组织渗透；

探针尺寸4-6nm；

应用：

1.       Widefield microscopy (IF)

2.       Confocal microscopy (IF)

3.       Super resolution microscopy

4.       Western blot

与其他亲和标签的比较：

非常坚固，非常稳定，各种洗脱条件的比较：

Spot-Trap适用于蛋白纯化；

用100uM 的spot-peptide或200mM甘氨酸洗脱，pH 2.5, 可以再生spot-trap。然而，为了避免交叉污染，建议重复使用spot-trap来纯化相同的蛋白质。

5 full cycles of affinity purification (loading, washing, peptide elution,regeneration) of mCherry-Spot fromE. coli. (WB) 5个完整的亲和纯化循环(装载、洗涤、肽洗脱、再生)

Spot-Label 应用：免疫荧光和超高倍显微镜；

Spot-Label, bivalent for Super Resolution Microscopy：

产品清单：

可以申请试用装！

相对于以下产品,更有优势：

1.   Sigma’s FLAG-tag, Thermo’s Capture Select C-tag (EPEA-tag), IBA’s Strep II

2.  HA-, Myc-, V5-, and Poly-His-tags etc.

3.  除了与Nanobody结合的C-tag、与Strep-Tactin结合的Strep II和通常与Ni-NTA结合的Poly-His聚组氨酸之外，肽标签通常与常规抗体结合；

Why Spot-Tag and Spot-Trap?

•常规抗体不如Nanobody稳定；spot-trap很坚固；许多应用需要苛刻的条件，例如泛素化分析；

•Spot-Tag比 3个 FLAG-Tag还要小;并具有更好的亲和力； 

•Spot-Trap亲和力比抗Myc IgG抗体9E10高2个数量级；

•spot系统亲和力比C-tag/Nanobody 高两个数量级，且C-Tag仅作用于C端

• Strep II较大，步骤二插入可能难以克隆，并可能降低表达水平；