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技术宝典—Chromotek
Spot系统(Affinity Optimized Short Peptide Tag)

 

Spot系统(Affinity Optimized Short Peptide Tag)

Chromotek 特殊构建的短肽标签系统,第一个多肽特异性纳米抗体,可以同时用于捕获和检测的标签系统

 

 

 

ChromoTek Spot系统基本元素是Spot-多肽标记特异性抗体,可用作捕获抗体、检测抗体。

由一段12个氨基酸长度的肽链Spot-标记,和一个普适性非常广的Spot-抗体组成。

Spot-抗体上结合了Spot-标记,具有非常高的亲和力。

具体有以下4个产品:

l  Spot-Trap

用于免疫沉淀(IP)和亲和纯化(AP

是一种Spot抗体,结合在琼脂糖胶或者磁珠上。

 

l  Spot-Label

用于免疫荧光(IF)和免疫印迹(WB

Spot-Label是结合了荧光染料的Spot抗体,也可以用于超高倍显微镜检测。

 

l  Spot-Tag Vectors

Spot-标记质粒:

用于Spot-标记蛋白的表达

Spot-标记也可以用PCR引物进行克隆

 

l  Spot-Peptide

洗脱结合Spot-标记的融合蛋白,可用于spot-trap的再生和重复使用;

 

 

Spot-tag的特征和优势

关键特征:

小:12个氨基酸,1.4kDa大小;氨基酸序列:PDRVRAVSHWSS

等电点pH10.4

亲水性

惰性

消光系数:5500L/mol/cm

 

关键优势:

极易克隆

N端和C端都能作用

高表达

在细菌、真菌、哺乳动物细胞系,植物和昆虫细胞中都能检测

 

 

所有好的抗体所具备的条件,Spot抗体都有:

高质量的重组蛋白

序列已知

结构稳定

蛋白结合机制简明

 

 

Spot-抗体的特征和优势

关键特征:

特点明确,性能清楚;

小: 14.7kDa2-3nm大小

Spot-标记有高亲和力:KD = 0.7 nM

高化学和热力学稳定性:Tm = 65.1

无重链轻链干扰

Spot-Peptide或变化pH洗脱

可重复利用

 

关键优势:

特异性高,杂背景小

恶劣条件下,稳定性好

自然洗脱和专业洗脱都行

高特异性结合蛋白

更高的分辨率

良好的样本渗透和表位结合能力

高检测限值

平行实验验证确保质量

 

总而言之,spot-tag spot-nanobody 用途多,可以同时用于捕获和检测;

 

相应产品有如下优点:

*  Spot-Trap

无轻链和重链污染;

恶劣的洗涤条件;

天然和非天然洗脱;

高亲和性,严格洗涤

应用: IP COIP;  亲和纯化;

*  Spot-Label

高分辨率和标记密度;

更好的表位获取和组织渗透;

探针尺寸4-6nm

应用:

1.       Widefield microscopy (IF)

2.       Confocal microscopy (IF)

3.       Super resolution microscopy

4.       Western blot

 

 

与其他亲和标签的比较:

非常坚固,非常稳定,各种洗脱条件的比较:

 

Spot-Trap适用于蛋白纯化;

100uM spot-peptide200mM甘氨酸洗脱,pH 2.5, 可以再生spot-trap。然而,为了避免交叉污染,建议重复使用spot-trap来纯化相同的蛋白质。

 

 

5 full cycles of affinity purification (loading, washing, peptide elution,regeneration) of mCherry-Spot fromE. coli. (WB) 5个完整的亲和纯化循环(装载、洗涤、肽洗脱、再生)
 
Spot-Label 应用:免疫荧光和超高倍显微镜;
Spot-Label, bivalent for Super Resolution Microscopy
 
产品清单:
可以申请试用装!
相对于以下产品,更有优势:
1.   Sigma’s FLAG-tag, Thermo’s Capture Select C-tag (EPEA-tag), IBA’s Strep II
2.  HA-, Myc-, V5-, and Poly-His-tags etc.
3.  除了与Nanobody结合的C-tag、与Strep-Tactin结合的Strep II和通常与Ni-NTA结合的Poly-His聚组氨酸之外,肽标签通常与常规抗体结合;
 
Why Spot-Tag and Spot-Trap?
•常规抗体不如Nanobody稳定;spot-trap很坚固;许多应用需要苛刻的条件,例如泛素化分析;
Spot-Tag 3 FLAG-Tag还要小;并具有更好的亲和力; 
Spot-Trap亲和力比抗Myc IgG抗体9E102个数量级;
spot系统亲和力比C-tag/Nanobody 高两个数量级,且C-Tag仅作用于C
 Strep II较大,步骤二插入可能难以克隆,并可能降低表达水平;
 

 

产品咨询:sales@biotnt.com    BioTNT订阅号:
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