最近，一种新的明亮的单体黄绿色荧光蛋白被发表，称为mNeonGreen。 这种蛋白质常用于宽视场显微镜和超分辨率显微镜。mNeonGreen到底是什么？
mNeonGreen vs. GFP – 区别在哪里?
mNeonGreen的来源：GFP 最早是从水母（jellyfish Aequorea Victoria）中提取而来.后来,GFP被遗传修饰以产生大量具有特殊光谱或功能性质的GFP变体(衍生物)。最常见的变体EGFP具有488 nm处的激发峰和509 nm处的发射峰。大多数显微镜的滤光器设置针对这些波长进行了优化。
mNeonGreen与水母荧光蛋白的差距：mNeonGreen 不是GFP的变体(衍生物)。美国Scintillon研究所光生物学与生物成像系的Nathan C Shaner从头索动物文昌鱼的四聚体荧光蛋白中分离获得了一种新的单体黄绿色荧光蛋白mNeonGreen。 这是目前最新的青色荧光蛋白的优良荧光共振能量转移（FRET）受体。研究显示mNeonGreen是亮度最强的单体绿色或黄色荧光蛋白，执行特殊成像效果与融合标签在传统成像中的效果一样好，可用于随机单分子超分辨成像的融合标记。
蛋白序列层面上， mNeonGreen仅有 20-25%序列与 普通的 GFP衍生体序列一致；
比较EGFP(1) 和 mNeonGreen(2) 的氨基酸序列
1
mNeonGreen DNA 序列在下面找到
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/KC295282.1
https://www.ebi.ac.uk/ena/data/view/KC295282
由于与mNeonGreen的序列相似性较低，因此预期GFP变体的一般亲和工具(如抗体)不应与mNeonGreen结合，反之亦然。
mNeonGreen的激发和发射波长及亮度
此外，mNeonGreen在506 nm处具有激发最大值，在517 nm处具有发射最大值( Shaner等人，2013年)。mNeonGreen与大多数GFP筛选器集兼容。显然，当使用GFP滤波器时，它比GFP亮3倍；滤波器的优化可以进一步增加其亮度
mNeonGreen的大小和结构
mNeonGreen由237个氨基酸组成，分子量为26.6 kDa。这个大小，但不是序列，非常类似于包含239个氨基酸的EGFP，是26.9 kDa。据我们所知，mNeonGreen晶体结构尚未公布(在本博客发表之日)
mNeonGreen在线虫等多细胞生物中的表达
霍斯特特尔等人，2017，分析并比较了GFP融合蛋白和mNeonGreen融合蛋白在秀丽隐杆线虫中的表达模式。他们得出结论:“虽然mNeonGreen可能相当于GFP的强表达水平，但它代表了一种有价值的替代物，例如，在本研究中检测的许多非胚胎组织中”，并且“总体而言，我们的工作建立了mNeonGreen作为在多细胞生物体内成像的更亮的替代物。"
Applications of GFP and mNeonGreen
自从20世纪90年代初作为分子生物学工具引入以来，GFP及其变体已广泛用于多种应用，例如:
-免疫荧光(宽视场、共焦和超分辨率显微镜) -免疫沉淀( IP ) /共沉淀 -质谱分析(MS) -酶活性测定 -RIP/ ChIP 分析 -报告分析
为了处理多种实验选择，已经发明了专门的研究工具: 这些工具包括anti-GFP antibodies,GFP-Traps,GFP-Booster,等。此外，已经产生了应用优化的GFP衍生物:这些衍生物包括改进的光谱性质，例如大斯托克斯位移、分裂变体、pH敏感、快速折叠、氧化还原敏感、光活化等，变种。因此，在PubMed中，GFP本身被引用了34，000多次。
迄今为止，mNeonGreen主要用于细胞、组织或器官中作为融合蛋白的表达及其在宽视场、共焦和超分辨显微镜中的分析。mNeonGreen在STED中似乎更稳定，可以拍摄更多的图像。其表达模式对于强表达蛋白质是相同或非常相似的( Hostettler等2017年)。
免疫荧光 (IF)：抗mNeonGreen抗体32 F6 (小鼠单克隆)
免疫沉淀(IP)：mNeonGreen-Trap (羊驼单结构域抗体( sdAb、纳米体或VHH )，与琼脂糖或磁性琼脂糖偶联) 对于生化分析，包括质谱分析和酶活性测定，使用mNeonGreen - Trap免疫沉淀可以快速有效地分离mNeonGreen融合蛋白及其相互作用因子。
Western blot (WB)：抗mNeonGreen抗体32 F6 (小鼠单克隆)
ELISA：抗mNeonGreen抗体32 F6 (小鼠单克隆)和mNeonGreen - Trap (羊驼sdAb与琼脂糖或磁性琼脂糖偶联)
到目前为止，在撰写本博客之日，在PubMed上，mNeonGreen已经被引用了12次。在Google scholler中，已经有大约300次点击，其中一些可能没有关联。 现在，chrometek提供了第一种用于免疫荧光和Western blot的抗mNeonGreen抗体，据我们所知:这是小鼠单克隆、亚型IgG2a抗mNeonGreen抗体32 F6。验证了该方法的有效性。
抗mNeonGreen 抗体的亲和性
chrometek已经验证了抗mNeonGreen抗体32 F6的结合:它具有仅3.5 nM的解离常数KD的高亲和力。此外， mNeonGreen - Trap对mNeonGreen -融合蛋白及其相互作用伙伴的免疫沉淀进行了全面验证。当解离常数为2 nm时， mNeonGreen - Trap明显是对mNeonGreen的pull down 实验效果最好。 抗mNeonGreen抗体32 F6和mNeonGreen Trap是ChromoTek的目录产品，可根据我们的标准销售条款和条件购买。
文献
N.C. Shaner et al., A bright monomeric green fluorescent protein derived from Branchiostoma lanceolatum. Nat Methods. 2013 May;10(5):407-9. doi: 10.1038/nmeth.2413. Epub 2013 Mar 24.
Hostettler et al., The Bright Fluorescent Protein mNeonGreen Facilitates Protein Expression Analysis In Vivo, G3: Genes, Genomes, Genetics February 1, 2017 vol.7 no. 2 607-615; https://doi.org/10.1534/g3.116.038133
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