Chromotek 的GFP 产品这些特点 ，你知道么？

(Q&A) 以下资料来源于chromotek 官网资料，由BioTNT进行翻译整理而得；

1. GFP-Trap® 的图表,信息量有些大：

BioTNT解读：gta-20 结合力好，gtma-20 次之，gtm-20 结合力比较差；

gtma-20 和gtm-20可以用磁力方式进行洗脱；三者都可以用离心方式进行洗脱。如果仅根据结合力进行选择，可以选gta-20； 如果考虑结合力和磁力的实验操作方式，可以选择gtma-20； 不推荐gtm-20（结合力差，性价比低）；

2.我能从GFP-Trap®洗脱结合蛋白吗？

对于定量洗脱，您可以在95°C的SDS样品缓冲液中煮沸样品10分钟(见方案)，或在0.2M甘氨酸pH 2.5中孵育0.5至2分钟，然后用1 / 10 vol 1M Tris碱中和。

3.是否有可能从天然状态的GFP-Trap®洗脱结合蛋白，例如用于凝胶转移实验或功能测定？

您可以尝试用游离GFP洗脱。但是，请注意，该方法不会定量洗脱您感兴趣的融合蛋白。

4.如何避免与GFP-Trap®结合的非特异性蛋白相互作用？

关键步骤是稀释培养缓冲液中洗涤剂的浓度。我们建议洗涤剂的终浓度为0.1 % (例如NP - 40或TX - 100 )，终体积至少为0.4毫升。此外，我们建议测试洗涤缓冲液中的各种盐浓度(例如150mM – 500mM NaCl)，以去除非特异性结合的亲水蛋白。

5.洗脱的GFP结合蛋白会与IgG 特异性二抗交叉反应吗？

由于GFP - Trap中使用的结合蛋白与山羊、小鼠、大鼠或人抗体没有任何显著的同源性，因此不应发生与第二Ig特异性抗体的非特异性反应。

6.当我使用N端和C端GFP融合时，结合有什么不同吗？

GFP-Trap® 对C末端GFP融合具有稍高的亲和力。您可以通过延长培养时间( 1 - 2h，而不是15 - 30分钟)来补偿这一点。

7.我可以直接从组织样品中纯化GFP标记的融合蛋白，即在变性缓冲液中纯化吗？

原则上，即使在苛刻的缓冲条件下(例如含有0.1 % SDS或1M尿素的RIPA缓冲液)，GFP-Trap^®也是非常稳定的。

8.GFP标记的结构是否有可以结合到GFP-Trap®珠子上的尺寸限制？

没有.

9.如果洗脱液中有残留背景，该怎么办？

我们建议使用我们的结合对照( Bab - 20、bmab - 20或BMP - 20 )来预检验样品。

GFP-Trap® 可以识别哪些GFP 衍生体?

GFP-Trap^® 可识别:

·         eCFP, CFP, mCerulean

·         eGFP, wtGFP, GFP S65T, AcGFP, TagGFP, tagGFP2, sfGFP, pHluorin

·         eYFP, YFP, Venus, Citrine

10.      RFP-Trap® 可以识别哪些RFP 衍生体?

RFP-Trap^® 可识别: mRFP, mCherry, mRFPruby, mPlum, tagRFP, mKate2 

11.      GFP-Trap®生物物理参数是什么？

分子量: 14,1kDa
消光系数: 27055 M-1 cm-1

12.      RFP-Trap®的生物物理参数是什么?

分子量: 15,1 kDa
消光系数: 30035 M-1 cm-1

13.      Nano-Traps的解离常数是多少?

通常重链抗体对其抗原具有高亲和力，解离常数在低纳摩尔至皮摩尔范围内。chrometek已确定了以下KD值:

GFP-Trap:          1 pM, 皮摩 (10^-12 摩尔)*

RFP-Trap:          5 nM, 纳摩(10^-9 摩尔)

MBP-Trap:         4 nM, 纳摩(10^-9 摩尔)

GST-Trap:          1 nM, 纳摩(10^-9 摩尔)

*动力学参数使用了switchSENSE technology进行测量，用电可转换纳米杠杆分析分子间的相互作用。switchSENSE是来自Dynamic Biosensors的专有技术(www.dynamic-biosensors.com)。