Western Blotting
技术是把电泳分离的组分从凝胶转移到一种固相支持体,并以针对特定氨基酸序列的特异性试剂作为探针进行检测。使用的探针是抗体,它与附着于固相支持体的靶蛋白所呈现的抗原表位发生特异性反应。这种技术的作用是对非放射性标记蛋白组成的复杂混合物中的某些特异蛋白进行鉴别和鉴定。
仪器:高压锅、电动匀浆机、高速离心机、垂直板电泳转移装置、脱色摇床。
试剂:单去污剂裂解液、分离胶、4%浓缩loading、G250考马斯亮蓝溶液、5XSDS上样缓冲液、电泳缓冲液、转移缓冲液、10X丽春红染液、封闭液、TBST、TBS、显影液、定影液、抗体、ECL化学发光试剂。
杂品与耗材:各种规格的吸头、离心管和加样器;各种规格的烧杯、量筒和平皿等玻璃器材;硝酸纤维素膜,乳胶手套,口罩,保鲜膜,X-光片夹,X-光片,计时器,吸水纸。
Western Blotting 实验流程:
样本处理
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蛋白定量→→样本均一化→→制胶→→上样→→电泳→→转膜→→染膜→→封闭→→杂交上一抗→→二抗→→显色→→曝光→→数据处理→→膜的再生
请参考:
Western
Blot02——BioTNT WB一般操作流程及注意事项:http://www.biotnt.com/news/news_461.html