Biotnt Western blot（试剂配制）
试剂配制：
（一）母液
34.8mg/ml (200mmol/L)PMSF
溶解后，－20℃保存。
10％SDS
50℃水浴下溶解，室温保存。如在长期保存中出现沉淀，水浴溶化后，仍可使用。
5mol/LNaF氟化钠
溶解后，-20℃保存。
100mmol/L 激活矾酸钠
加浓盐酸调节pH至10（颜色变黄），80℃左右热水浴至溶液无色，室温冷却，重调pH至10，重复热水浴和调整pH的操作至溶液保持无色，定容10ml，-20℃保存。
1.0mol/L Tris•HCl（pH8.0）
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Tris (MW121.14)
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1.212g
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超纯水
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8ml
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溶解后，用浓盐酸调pH至8.0，后用超纯水定容至10ml，高温灭菌后室温下保存。
10％过硫酸胺（AP）
溶解后，4℃保存，保存时间为2周。
1.5mol/L Tris•HCl（pH8.8）
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Tris (MW121.14)
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45.43g
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超纯水
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200ml
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溶解后，用浓盐酸调pH至8.8，后用超纯水定容至250ml，高温灭菌后室温下保存。
0.5mol/L Tris•HCl（pH6.8）
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Tris (MW121.14)
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0.606g
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超纯水
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8ml
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溶解后，用浓盐酸调pH至6.8，后用超纯水定容至10ml，高温灭菌后室温下保存。
30％Acr/Bic（29：1）
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丙稀酰胺（Acr）
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14.5g
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甲叉双丙稀酰胺（Bic）
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0.5g
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超纯水至
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50ml
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37℃下溶解后，4℃保存。使用时恢复至室温且无沉淀。
20％Tween20
Tween20比较粘稠，需将大枪头前端剪掉，将吸口扩大，吸取和移液时应缓慢，避免液体挂壁，混匀后4℃保存。
（二）使用液
单去污剂裂解液RIPA（50mmol/L Tris•HCl pH8.0，150mmol/L NaCl，0.1％SDS，1mmol/L PMSF）：
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1mol/L Tris•HCl（pH8.0）
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2.5ml
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NaCl
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0.438g
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10%SDS
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0.5ml
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200mmol/L PMSF
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0.25ml
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蒸馏水至
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50ml
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若检测磷酸化蛋白，需加入100ul 5mol/L NaF和500ul 100mmol/L激活矾酸钠，混匀后， 4℃保存。
G250考马斯亮蓝溶液（染胶专用）
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考马斯亮蓝G250
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0.063g
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甲醇
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15ml
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乙酸
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5ml
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蒸馏水至
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50ml
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溶解后，4℃保存。
分离胶（两块胶，10ml）
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8％
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10%
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12%
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15%
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超纯水
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4.6ml
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4.0ml
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3.3ml
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2.3ml
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30％Acr/Bic（29：1）
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2.7ml
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3.3ml
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4.0ml
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5.0ml
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1.5 mol/L Tris•HCl（pH8.8）
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2.5ml
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2.5ml
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2.5ml
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2.5ml
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10％SDS
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100ml
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100ml
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100ml
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100ml
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10%AP（过硫酸胺）
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100ml
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100ml
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100ml
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100ml
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TEMED
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4ml
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4ml
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4ml
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4ml
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加 TEMED后，立即混匀即可灌胶。
4％浓缩胶（两块胶，5ml）
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超纯水
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2.1ml
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30％Acr/Bic（29：1）
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0.5ml
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0.5 mol/L Tris•HCl（pH6.8）
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0.38ml
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10％SDS
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30ml
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10%AP（过硫酸胺）
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30ml
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TEMED
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3ml
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加 TEMED后，立即混匀即可灌胶。
还原型5XSDS上样缓冲液loading buffer（0.25mol/L Tris/HCl pH6.8，0.5mol/L二硫叔糖醇，10％ SDS，0.5％溴酚蓝，50％甘油）
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0.5 mol/L Tris•HCl（pH6.8）
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0.5ml
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二硫叔糖醇（DTT，MW154.5）
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0.078g
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SDS
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0.1g
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10%溴酚蓝
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0.05ml
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甘油
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0.5ml
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混匀后，分装于1.5ml离心管中，4℃保存。
电泳液缓冲液（25mmol/L Tris，0.25mol/L甘氨酸，0.1％ SDS）
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Tris（MW121.14）
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1.515g
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甘氨酸（MW75.07）
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9.385g
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SDS
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0.5g
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蒸馏水至
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500ml
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溶解后室温保存，次溶液可重复使用2～3 次。
转移缓冲液（48mmol/L Tris，39mmol/L甘氨酸，0.01％ SDS，20％甲醇）
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甘氨酸（MW75.07）
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2.9g
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Tris（MW121.14）
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5.8g
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SDS
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0.1g
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甲醇
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200ml
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蒸馏水至
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1000ml
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溶解后室温保存，次溶液可重复使用2～3次。
10X丽春红染液
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丽春红S
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0.2g
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三氯乙酸
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3g
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磺基水杨酸
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3g
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蒸馏水至
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10ml
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溶解后，避光4℃保存，使用时将其稀释10倍，稀释液勿回收。
TBS缓冲液（100mmol/L Tris/HCl pH7.5, 150mmol/L NaCl）
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1 mol/ LTris•HCl（pH7.5）
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10ml
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NaCl
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8.8g
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蒸馏水至
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1000ml
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TBST缓冲液（含 0.05％Tween20的TBS缓冲液）
混匀后即可使用，好现用现配。
封闭液（含5％脱脂奶粉的TBST缓冲液）
溶解后4℃保存。使用时，恢复室温，用量以盖过膜面即可，一次性使用。
洗脱抗体缓冲液（100mmol/L 2-Mercaptoethanol，2％SDS，62.5m mol/L Tris•HCl pH6.8）
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14.4 mol/L 2-Mercaptoethanol(β-巯基乙醇)
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700 ml
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SDS
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2g
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0.5mol/L Tris•HCl（pH6.8）
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12.5ml
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超纯水至
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100ml
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配制时，在通风厨内进行。 4℃保存。可重复使用1次。
ECL化学发光试剂
商品化ECL化学发光试剂，推荐用普敏或者超敏，promega , thermo fisher 或者BioTNT 进口分装超敏；
举例：
promage产品，分A和B两种试剂，使用时等体积混合，每张膜使用混合液体积1ml。
以上western blot 试剂BioTNT均有商业化试剂提供给客户；采用与实验室的平行实验，同时质检，确保客户实验的顺利进行；
BioTNT 技术中心