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技术宝典—品牌产品篇
raybiotech G系列蛋白芯片操作说明书示例

raybiotech  AAH-GF-G1芯片操作流程

(参见英文protocol

1.实验材料及试剂

1.1 AAH-GF- G1试剂盒,试剂盒包含内容:

        玻片芯片---RayBio® Human  Growth Factor G1 Microarray slides (1个玻片上有4个或者8个阵列)

        生物素标记抗体---Biotin-Conjugated Anti-cytokines4个阵列配1管,8个阵列配2管)

        1500×荧光标记链霉亲和素­­---Cy3 equivalent1管)

        1X封闭缓冲液---Blocking Buffer, 30ml)

        20X的洗液I ---20X Wash Buffer I30 ml)

        20X 的洗液II---20X Wash Buffer II, 30 ml)

        2X细胞裂解液---2X Cell Lysis Buffer10ml

        玻片芯片配件--(玻片框架、垫圈、搭扣边、密封条)

        30ml---tube

        操作手册

1.2 所需除试剂盒以外的材料及仪器:

        塑料离心管(2-5ml50ml)

        摇床

        塑料保鲜膜

        双蒸馏水

         Genepix荧光扫描仪

         Thermo Scientific Wellwash Versa芯片洗板机

1.3 样品:

8个细胞上清

2 、实验步骤

2.1  玻片芯片的完全干燥

 将玻片芯片从盒子中取出来,在室温平衡20-30min后,将包装袋打开,揭开密封条,然后将芯片放在真空干燥器或者室温干燥1-2小时。

2.2  封闭和孵育

    1 每个芯片孔中加入100µL1×封闭液,室温摇床上孵育30min,避免产生气泡;

 2抽去封闭液,每个孔中添加100µL样品(原液),一个阵列一个样品;(4 振荡过夜孵育。样品离心13000rpm,8min)

3 使用Thermo Scientific Wellwash Versa芯片洗板机清洗玻片,分为两步,首先用1×洗液I进行清洗,每孔250µL1×洗液I,清洗6次,每次震荡10s,震荡强度选择高,用去离子水稀释20×洗液I。然后换用1×洗液II通道进行清洗,每孔250µL1×洗液II,清洗5次,每次震荡10s,震荡强度选择高,用去离子水稀释20×洗液II

4配制生物素标记抗体,快速离心生物素标记抗体的小管,每个小管加入300µL1×封闭液,混合均匀。每孔加入70µL生物素标记抗体;

5清洗,同步骤3).

6 每孔加入70µL1500倍稀释的荧光剂-链霉亲和素 (快速离心后加入1.5mL的封闭液到荧光剂-链霉亲和素的小管),用密封条贴住玻片,然后用铝箔纸包住玻片避光室温震荡孵育1-2个小时。(此步也可在4℃过夜孵育)

7 清洗,同步骤3).

2.3 荧光检测

采用激光扫描仪例如Axon GenePix扫描信号, 采用Cy3或者绿色通道(激发频率=532nm

1) 扫描仪器: GenePix 4000B Microarray Scanner  

2) 产地:MoLecµLar Devices, LLC1311 OrLeans Drive SunnyvaLe, CA 94089-1136 United States

3) 扫描参数:PMT: 650, WaveLengh532nm resoLution10um

  采用芯片分析软件提取数据,采用AAH-GF-G1的数据分析软件来进行数据分析。

实验注意事项

A 玻片的操作

1)        不能触摸玻片的表面,因为玻片芯片非常灵敏,只能接触玻片的边缘;

2)        操作实验时候,请戴上橡胶手套(不掉粉末),以免污染试剂和玻片;

3)        避免打碎玻片

4)  保持实验操作环境整洁;

B 孵育

1)        样品和试剂孵育过程中,保证完全覆盖住玻片,且不能使玻片干燥

2)        孵育过程中避免产生气泡

3)        孵育过程和清洗过程保持在摇床上轻摇

4)        在孵育过程中,用密封条将玻片芯片封闭,尤其是当孵育时间超过2个小时,或者样品、试剂的体积小于70µL的时候。

5)        避免附近孔的交叉污染,邻近孔的液体避免溢出污染。

6)        封闭、样品孵育、检测抗体孵育、Cy3-链霉亲和素孵育都可以在4℃孵育过夜,但是请务必封闭玻片芯片非常严密,以免液体蒸发;

 

 

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