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技术宝典— ELISA
BioTNT ELISA 11 ------ Cell-Based ELISA及其应用

1、Cell-Based ELISA 的优点:

 

Cell-Based ELISA(基于细胞的 ELISA)是一种全新的ELISA技术,有两个最突出的优点:

1.1不需要抽提蛋白、包被微孔板:细胞直接在微孔板里培养,待检测的时候,将细胞固定在微孔板上并进行通透处理即可。这样就避免了抽提蛋白时,由于客观和主观上引起样品的损失而导致实验结果在一定程度上偏离了实际情况。同时不用包被微孔板,简化了实验流程,有助于提高效率。科研人员在一个 96 孔酶联板上,便能检测目标细胞蛋白经刺激或抑制作用后的表现。由于省去抽提蛋白和裂解细胞的步骤,样本的损失也能降到最低,比起其他普通的 ELISA 测定方法,这项全新的 ELISA 技术能更快速、更方便地一次检测大量的细胞内蛋白。

1.2  可同时检测两种不同蛋白:封闭后加入两种抗不同蛋白且来源于不同宿主的一抗,然后再加入不同的二抗,加入两种荧光底物,检测两个波长。同时检测两种蛋白的好处是显而易见的,可以减少工作量,此外还可以满足一些特殊的实验需要,例如,需要测定某个蛋白的磷酸化比例,就需要测定磷酸化蛋白的数量和总蛋白的数量,这两个测定在同一次实验进行,有助于消除实验误差,得到更为精确的实验结果。

 

 

2、Cell-Based ELISA  的两种技术:

 

某些公司发展了双通道Cell-Based ELISA技术;

双通道与单通道Cell-based ELISA比较:

双通道cell-based ELISA,顾名思义,即一次可以同时检测两种目的蛋白,R&D Systems提供的Cell-based ELISA就是双通道cell-based ELISA,原理略:(需要荧光检测方式和相应仪器);

单通道cell-based ELISA,即一次只能检测一种目的蛋白,他和普通ELISA的主要区别在于样品处理过程:

 

 

3、cell-based ELISA 的应用:

 

该产品,最多发展起来的是用于检测磷酸化和非磷酸化蛋白的相对含量;

 


4、有 Cell-Based ELISA 产品的公司:目前,多家elisa 产品提供商均

 

目前,多加ELISA产品提供商均提供 Cell-Based ELISA 试剂盒,如Rnd systems, raybiotech, ebioscience, millipore 等公司;

 

 

5、如何自己进行 Cell-Based ELISA 实验


事实上,根据单通道的cell based elisa 原理,可以自己建立cell based elisa 实验系统;
细胞加入培养板中;
加入刺激物或者抑制剂进行培养;
对细胞进行固定或者封闭;
加入第一抗体;
加入HRP 结合的二抗(二抗的选择,同western blot);
加入底物进行显色;

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