一、ELISA实验中血清的采集、处理和保存

1、真空采血针采集新鲜血液，加入无菌试管中；

2、采血后室温静置1小时；

3、将采集血液用离心机4℃，2500rpm离心10min；

4、取上清。分装冻存备用：

2-8℃下，可放置保存24-48小时；

-20℃下，可放置保存1个月；

-80℃下，可放置保存6个月；

5、根据你的实验需要，取适量上清夜进行各种ELISA测定。

大部分ELISA检测均以血清为标本。血清标本可按常规方法采集，应注意避免溶血，红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质，以HRP为标记的ELISA测定中，溶血标本可能会增加非特异显色。此外还应避免细菌污染，因为菌体中可能含有含有内源性HRP，也会产生假阳性反应。血清标本宜在新鲜时检测。如在冰箱中保存过久，其中的可发生聚合，在间接法ELISA中可使本底加深。

二、ELISA 实验中血浆的采集、处理和保存

1、真空采血针采集2ml 新鲜血液，加入无菌试管中；

2、按 1:9加入抗凝剂（EDTA、草酸钠、肝素、枸橼酸钠），30分钟内于冰上分离血浆以减少血小板的污染；（也可以直接用抗凝管采集）；

3、将采集血液用离心机4℃，2500rpm离心5min；

4、取上清。分装冻存备用，

2-8℃下，可放置保存24-48小时；

-20℃下，可放置保存1个月；

-80℃下，可放置保存6个月；

5、根据你的实验需要，取适量上清夜进行各种ELISA测定。请注意指标说明书上对于抗凝血剂是否有特殊要求，建议使用EDTA。血浆中除尚含有纤维蛋白原和抗凝剂外，其他成份均同等于血清。制备血浆标本需借助于抗凝剂EDTA，抗凝不完全的标本因纤维蛋白原干扰而造成假阳性。

三、ELISA 实验中尿液的采集、处理和保存

1、采集尿液样本500ul，加入无菌试管中；

2、将采集尿液用离心机4℃，2500rpm离心10min；

3、取上清。分装冻存备用：

2-8℃下，可放置保存24-48小时；

-20℃下，可放置保存1个月；

-80℃下，可放置保存6个月；

4、根据你的实验需要，取适量上清夜进行各种ELISA测定。

四、ELISA 实验中脑脊液的采集、处理和保存

1、采集脑脊液样本，加入无菌试管中；

2、将采集的脑脊液用离心机4℃，2500rpm 离心10min；

3、取上清。分装冻存备用：

2-8℃下，可放置保存24-48小时；

-20℃下，可放置保存1个月；

-80℃下，可放置保存6个月；

4、根据你的实验需要，取适量上清夜进行各种ELISA 测定。

五、ELISA 实验中细胞上清液的采集、处理和保存

1、采集细胞培养上清液，加入无菌试管中；

2、将采集的细胞上清液用离心机4℃，2500rpm离心10min；

3、取上清。分装冻存备用：

2-8℃下，可放置保存24-48小时；

-20℃下，可放置保存1个月；

-70℃下，可放置保存6个月；

4、根据你的实验需要，取适量上清夜进行各种ELISA 测定。

六、ELISA 实验中肺泡灌洗液的采集、处理和保存

1、10%水合氯醛溶液，腹腔麻醉；

2、打开腹腔，另取10ml注射器行下腔静脉采血，尽可能将血放尽；

3、在冰面上对左肺进行肺灌洗。取37℃生理盐水5ml，分三次灌洗：2ml、1.5ml、1.5ml灌，。回收率在70%以上；

4、将采集的肺泡灌洗液用离心机4℃，2500rpm离心10min；

5、取上清。分装冻存备用：

2-8℃下，可放置保存24-48小时；

-20℃下，可放置保存1个月；

-70℃下，可放置保存6个月；

6、根据你的实验需要，取适量上清夜进行各种ELISA 测定。

七、ELISA 实验中关节滑液的采集、处理和保存

1、口腔关节：患者取坐位，常规消毒后，作皮下及关节后区局部浸润麻醉。然后嘱患者大张口，采用装有2ml生理盐水的注射器（5号针头）作关节上腔 穿刺，髁后进针，针尖方向斜向前、内、上，抵达关节结节后斜面后稍后退，回抽如发现有淡黄色液体，即表明已进入关节上腔，注入2ml生理盐水，反复注入、回抽五次；

2、膝骨关节滑液：无菌穿刺取得关节液3ml；

3、将采集的关节滑液用离心机4℃，1500rpm离心15min；

4、取上清。分装冻存备用：

2-8℃下，可放置保存24-48小时；

-20℃下，可放置保存1个月；

-70℃下，可放置保存6个月；

5、根据你的实验需要，取适量上清夜进行各种ELISA 测定。

八、ELISA 实验中细胞的采集、处理和保存

1、细胞板贴壁细胞直接裂解：细胞弃培养上清，PBS清洗三遍，加适量裂解液重悬（过量会降低浓度，很重要），超声破碎或用枪吹打100下；

2、细胞团块裂解：细胞团块加1ml PBS重悬（注意不要过于剧烈造成细胞破裂），1000rpm离心5分钟，弃上清，重复3次，加适量裂解液重悬（过量会降低浓度，很重要），超声破碎或用枪吹打100下；

3、悬浮细胞裂解：转移至EP管，1000rpm离心5分钟，弃上清，PBS洗三遍，加适量裂解液重悬（过量会降低浓度，很重要），超声破碎或用枪吹打100下；

4、冰上裂解30mins，用离心机4℃，12000rpm离心10mins；

5、取上清。分装冻存备用：

2-8℃下，可放置保存24-48小时；

-20℃下，可放置保存1个月；

-70℃下，可放置保存6个月；

6、根据你的实验需要，取适量上清夜进行各种ELISA 测定。

根据要检测的指标，必要时需要加入蛋白酶抑制剂。如果处理后马上检测，也可以不加这些抑制剂直接裂解，裂解液的量根据不同细胞系会有不同，原则为裂解后总蛋白浓度不低于0.5mg/ml。

九、ELISA 实验中易碎软组织（脑、肝、肾）的采集、处理和保存

1、称取组织块（50mg-100mg），按质量体积比1：9加入裂解液（例：50mg组织湿重加入450ul裂解液）；

2、冰水浴中用眼科剪剪碎组织块；

3、冰水浴中电动匀浆机或超声破碎；

4、用离心机4℃，12000rpm离心15mins；

5、取上清。分装冻存备用：

2-8℃下，可放置保存24-48小时；

-20℃下，可放置保存1个月；

-70℃下，可放置保存6个月；

6、根据你的实验需要，取适量上清夜进行各种ELISA 测定。

根据要检测的指标，必要时需要加入蛋白酶抑制剂。如果处理后马上检测，也可以不加这些抑制剂直接裂解。

十、ELISA 实验中心肌、肌肉组织的采集、处理和保存

1、称取组织块（50mg-100mg），按质量体积比1：9加入裂解液（例：50mg组织湿重加入450ul裂解液）；

2、冰水浴中用眼科剪剪碎组织块；

3、冰水浴中研磨棒研磨或超声破碎；

4、用离心机4℃，12000rpm离心15mins；

5、取上清。分装冻存备用：

2-8℃下，可放置保存24-48小时；

-20℃下，可放置保存1个月；

-70℃下，可放置保存6个月；

6、根据你的实验需要，取适量上清夜进行各种ELISA 测定。

心肌、肌肉组织无法用匀浆机匀浆，组织块会绞入钻头形成团块，无法被匀浆机刀头切碎，需用研磨或超声才能充分破碎。根据要检测的指标，必要时需要加入蛋白酶抑制剂。如果处理后马上检测，也可以不加这些抑制剂直接裂解。

十一、ELISA 实验中上皮组织（皮肤、膀胱、肠）及人或大鼠眼角膜的采集、处理和保存

1、称取组织块（50mg-100mg），按质量体积比1：9加入裂解液（例：50mg组织湿重加入450ul裂解液）；

2、冰水浴中用眼科剪剪碎组织块；

3、冰水浴中研磨棒研磨或超声破碎；

4、用离心机4℃，12000rpm离心15mins；

5、取上清。分装冻存备用：

2-8℃下，可放置保存24-48小时；

-20℃下，可放置保存1个月；

-70℃下，可放置保存6个月；

6、根据你的实验需要，取适量上清夜进行各种ELISA 测定。

上皮组织韧性较强，较难剪碎，需要增加组织破碎时间才能充分破碎。根据要检测的指标，必要时需要加入蛋白酶抑制剂。如果处理后马上检测，也可以不加这些抑制剂直接裂解。

十二、ELISA 实验中小颗粒组织（神经节、小鼠眼角膜、巩膜）的采集、处理和保存

1、加入200ul裂解液；

2、冰水浴中用显微剪剪碎组织块；

3、冰水浴中研磨棒研磨或超声破碎；

4、用离心机4℃，12000rpm离心15mins；

5、取上清。分装冻存备用：

2-8℃下，可放置保存24-48小时；

-20℃下，可放置保存1个月；

-70℃下，可放置保存6个月；

6、根据你的实验需要，取适量上清夜进行各种ELISA 测定。

小颗粒组织量比较小，会有靶标蛋白量低于检测限度的风险，注意组织匀浆离心后上清总蛋白浓度需大于0.5mg/ml。根据要检测的指标，必要时需要加入蛋白酶抑制剂。如果处理后马上检测，也可以不加这些抑制剂直接裂解。