IF 5.125| BioTNT助力生物医学研究：亚氨基二丙腈诱导抽动障碍大鼠丘脑代谢物异常的新发现
2023年9月，绍兴大学医学院在国际期刊《Frontiers in Neuroscience》上发表的，题为“New insights of metabolite abnormalities in the thalamus of rats with iminodiproprionitrile-induced tic disorders”的论文。Xin Zhang, Juanjuan Hao同位第一作者，Juanjuan Hao为通讯作者。
背景：抽动障碍（TD）是一种神经发育障碍，其特征是突然、快速的重复性非节律性运动（运动抽动）和/或声音（发声抽动）。抽动通常在儿童时期出现，在 10 至 12 岁左右达到严重程度高峰，然后在青春期消退，但有些会持续到成年。大多数 TD 患者还表现出一种或多种共病精神障碍，如强迫症（OCD）、注意力缺陷多动障碍（ADHD）、自闭症谱系障碍（ASD）、愤怒发作、学习障碍和执行功能障碍。TD，特别是伴有严重抽动和精神共病的 TD，对患者的生活质量、社会功能和学业成就产生相当大的负面影响。一项调查报告称 TD 与从儿童时期开始的肥胖、2 型糖尿病和循环系统疾病的风险增加有关，还与早逝风险增加有关。然而，TD 尚未得到足够的关注，迫切需要深入研究。
研究信息：本研究首先观察了 IDPN 诱导的 TD 大鼠丘脑中“Glu - GABA”代谢回路的病理变化。我们还探讨了硫必利（一种选择性多巴胺 D2/D3 - 受体拮抗剂）的潜在治疗机制，用于治疗 TD。最后，我们应用广泛靶向代谢组学技术全面检测和分析 TD 中的代谢物异常。
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A20120A0702
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100ul
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2.4. Western blot 检测 GAD65、GAD67 和 GAT-1
将每组 6 个的丘脑样本进行匀浆和裂解，所用裂解液为 RIPA（50 mmol/L Tris•HCl，pH 8.0，150 mmol/L NaCl，1% SDS，1 mmol/L PMSF）。采用 Bradford 法测定蛋白浓度。利用 GAD65（1:5000，ab239372，Abcam，英国剑桥）、GAD67（1:1000，ab213508，Abcam，英国剑桥）和 GAT-1（1:1000，ab177483，Abcam，英国剑桥）一抗进行西方印迹法检测，4°C 下过夜孵育。孵育完成后，用含 Tween 20 的 Tris 缓冲盐水洗涤膜三次，随后在室温下与二抗（1:10000）孵育 1 小时，并用 TBST 洗涤六次，每次 3 分钟。利用增强化学发光法（WBKLS0500，Millipore）显色，采用 Total Lab Quant V11.5（英国纽卡斯尔）检测电化学发光信号。β-Actin（A20120A0702，BioTNT）作为内参，用于验证加载到凝胶上的蛋白量。
结果：
三组间 GAD67 蛋白表达比较。与对照组相比，## 表示 p < 0.01；与 IDPN 诱导的 TD 组相比，* 表示 p < 0.05。
三组间 GAD65、GAD67 和 GAT-1 蛋白表达水平比较。A 为对照组，B 为 IDPN 诱导的 TD 组，C 为硫必利（Tia）组。
结论：本研究首次揭示了氨基二丙腈（IDPN）诱导的抽动障碍（TD）大鼠丘脑中的代谢异常。研究发现，IDPN诱导的TD大鼠表现出兴奋性/抑制性（E/I）平衡的破坏以及“谷氨酸（Glu）-γ-氨基丁酸（GABA）”代谢回路的异常。此外，与对照组相比，TD组的类固醇水平（孕酮、11-脱氧皮质酮、脱氧皮质酮、皮质酮）存在显著差异。因此，类固醇激素生物合成途径可能参与了TD的发病机制。应当考虑丘脑神经递质代谢紊乱的问题。