IF 5.125| BioTNT助力生物医学研究:亚氨基二丙腈诱导抽动障碍大鼠丘脑代谢物异常的新发现
2023年9月,绍兴大学医学院在国际期刊《Frontiers in Neuroscience》上发表的,题为“New insights of metabolite abnormalities in the thalamus of rats with iminodiproprionitrile-induced tic disorders”的论文。Xin Zhang, Juanjuan Hao同位第一作者,Juanjuan Hao为通讯作者。
背景:抽动障碍(TD)是一种神经发育障碍,其特征是突然、快速的重复性非节律性运动(运动抽动)和/或声音(发声抽动)。抽动通常在儿童时期出现,在 10 至 12 岁左右达到严重程度高峰,然后在青春期消退,但有些会持续到成年。大多数 TD 患者还表现出一种或多种共病精神障碍,如强迫症(OCD)、注意力缺陷多动障碍(ADHD)、自闭症谱系障碍(ASD)、愤怒发作、学习障碍和执行功能障碍。TD,特别是伴有严重抽动和精神共病的 TD,对患者的生活质量、社会功能和学业成就产生相当大的负面影响。一项调查报告称 TD 与从儿童时期开始的肥胖、2 型糖尿病和循环系统疾病的风险增加有关,还与早逝风险增加有关。然而,TD 尚未得到足够的关注,迫切需要深入研究。
研究信息:本研究首先观察了 IDPN 诱导的 TD 大鼠丘脑中“Glu - GABA”代谢回路的病理变化。我们还探讨了硫必利(一种选择性多巴胺 D2/D3 - 受体拮抗剂)的潜在治疗机制,用于治疗 TD。最后,我们应用广泛靶向代谢组学技术全面检测和分析 TD 中的代谢物异常。
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A20120A0702
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100ul
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2.4. Western blot 检测 GAD65、GAD67 和 GAT-1
将每组 6 个的丘脑样本进行匀浆和裂解,所用裂解液为 RIPA(50 mmol/L Tris•HCl,pH 8.0,150 mmol/L NaCl,1% SDS,1 mmol/L PMSF)。采用 Bradford 法测定蛋白浓度。利用 GAD65(1:5000,ab239372,Abcam,英国剑桥)、GAD67(1:1000,ab213508,Abcam,英国剑桥)和 GAT-1(1:1000,ab177483,Abcam,英国剑桥)一抗进行西方印迹法检测,4°C 下过夜孵育。孵育完成后,用含 Tween 20 的 Tris 缓冲盐水洗涤膜三次,随后在室温下与二抗(1:10000)孵育 1 小时,并用 TBST 洗涤六次,每次 3 分钟。利用增强化学发光法(WBKLS0500,Millipore)显色,采用 Total Lab Quant V11.5(英国纽卡斯尔)检测电化学发光信号。β-Actin(A20120A0702,BioTNT)作为内参,用于验证加载到凝胶上的蛋白量。
结果:
三组间 GAD67 蛋白表达比较。与对照组相比,## 表示 p < 0.01;与 IDPN 诱导的 TD 组相比,* 表示 p < 0.05。
三组间 GAD65、GAD67 和 GAT-1 蛋白表达水平比较。A 为对照组,B 为 IDPN 诱导的 TD 组,C 为硫必利(Tia)组。
结论:本研究首次揭示了氨基二丙腈(IDPN)诱导的抽动障碍(TD)大鼠丘脑中的代谢异常。研究发现,IDPN诱导的TD大鼠表现出兴奋性/抑制性(E/I)平衡的破坏以及“谷氨酸(Glu)-γ-氨基丁酸(GABA)”代谢回路的异常。此外,与对照组相比,TD组的类固醇水平(孕酮、11-脱氧皮质酮、脱氧皮质酮、皮质酮)存在显著差异。因此,类固醇激素生物合成途径可能参与了TD的发病机制。应当考虑丘脑神经递质代谢紊乱的问题。