产品参数
ELISA Construction PackI使用说明书Version1.0
(cat:EL-CPI-5)
(cat:EL-CPI-20)
(cat:EL-CPI-50)
试剂清单
产品编号
|
产品名称
|
EL-CPI-5
|
EL-CPI-20
|
EL-CPI-50
|
EL-CPI01
|
coating buffer 包被缓冲液
|
15ml(10X)
|
60ml (10X)
|
150ml(10X)
|
EL-CPI02
|
酶标板稳定剂
|
100ml(即用型)
|
400ml(即用型)
|
1000ml(即用型)
|
EL-CPI03
|
显色液A,B(Substrate A,B)
|
30ml(各1瓶,共两瓶)
|
120(各1瓶)
|
300ml(各1瓶)
|
EL-CPI04
|
终止液(Stop Solution)
|
50ml(即用型)
|
200ml(即用型)
|
500ml/(即用型)
|
EL-CPI05
|
酶标板自封铝箔袋
|
5个
|
20个
|
50个
|
EL-CPI06
|
干燥剂
|
5袋
|
20袋
|
50袋
|
试剂清单
注意事项及说明:
Ø 上述试剂均可2-8℃保存,保质期为一年;其中终止液可以室温或低温保存;
Ø 试剂如储存时间较久,请在正式实验前进行预实验验证试剂质量;
Ø 显色液B液需避光保存;
Ø 酶标板稳定剂经0.2um过虑,含非汞防腐剂以抑制保存过程中微生物繁殖;
Ø 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴防护手套操作。
试剂使用说明和包被实验示例:
一、包被液的配制:
coating buffer 包被缓冲液(EL-CPI01):该试剂为10X 浓缩液,使用前请根据实验用量,用蒸馏水稀释至1X,即配即用,例:10ml coating buffer + 90ml蒸馏水;
Coating buffer 用于抗体的包被;可替代以PBS为主的包被液体;请用1* coating buffer和适量抗体配成包被液,抗体浓度请参考抗体的说明。
二、包被实验示例:
在ELISA酶标板(EL-CPI02)中每孔加入100ul包被液(包被液若有剩余可多包被一点,以条为单位),在板上贴膜,室温(控制室温在25℃,板放置处旁放置温度计控温)温育过夜(下午4点到第二天早上9点,不宜缩短时间,会降低包板效率);结束温育(也请参考抗体说明书的包被条件进行相应调整)。多余的配好的包被液不能保存。
三、洗板封闭:
1) 将洗液20×Wash Buffer(EL-00402)(可以用PBS +Tween 20代替)配制成1×Wash Buffer(实验前请合理计算用量,配制成足够的量待用),用1×Wash Buffer洗板4次(注:包被组分在加稳定剂前不能剧烈震荡或完全干燥,所以洗板过程需快速、温和,不要拼命拍板);
2) 洗板后立即加入200ul每孔的酶标板稳定剂(EL-CPI02),37℃温育1小时;
3) 弃掉或吸取酶标板稳定剂(注:拍干,千万不要洗板)。
封闭好的酶标板可以有以下几种处理方式。
方式一:直接进行检测。
方式二:
1) 冻干成品:把酶标板放入冰箱,-20℃冰箱冷冻过夜。
2) 调试真空冻干机,立即将冷冻过夜的酶标板放入真空冻干机冻干24小时;
3) 取出冻干的酶标板,立即将酶标板放入一个装有干燥剂(EL-CPI06)的铝箔袋内(EL-CPI05),贴上标签,放4℃冰箱长期保存。(冻干同时可进行标准品冻干)。
方式三:室温晾干
按照以下方法晾干长期保存:
1) 室温或者 37°C ;
2) 湿度: 最好在一个湿盒中(小于 15% 湿度);
3) 时间: 2-24 小时,晾干;确认干燥
4) 立即将将经过稳定剂处理的产品封装在一个含有干燥剂(EL-CPI06)的密闭防潮容器中,正确使用干燥剂包装是长期保存的关键。
注意:如果酶标板不直接进行检测,必须采用方式二或者方式三,进行干燥。干燥后的酶标板才可以稳定保存。
四、检测方法示例
(请参考抗体说明,安排相应的检测方法,根据您的实验路线,如果是双抗夹心法,可以选择酶标二抗,也可以选择生物素二抗,采用生物素-亲和素的放大系统):
实验示例:下面是双抗夹心法的实验示例:
1) 以上的酶标板已经预包被了抗体,选取相应的板条;
2) 标准品请用相应的稀释液稀释;如检测的是血清,标准品用EL-CPV02稀释;如果检测的是细胞上清样品或其他非血清样品,请用EL-CPV03稀释;
3) 酶标板中加入适量稀释好的标准品和样品,各100ul;
4) 37度温育1到2小时;
5) 洗板四次(洗液同上);
6) 生物素二抗请根据说明书,用生物素(Biotin)稀释液(EL-CPV04)进行稀释;
7) 37度温育30分钟;
8) 洗板四次;
9) 酶标二抗,请用(EL-CPV05)稀释;
10) 每孔加入100ul 稀释好的酶标二抗,37度温育1小时或其他时间;
11) 洗板四次;
12) 加入显色液:显色液A,B(Substrate A,B)(EL-CPI03);使用前请按按照A液和B液1:1比例充分混匀,方可使用,使用前15分钟配置;每孔加入50ul-100ul混合后的显色液;室温温育10-30分钟:显色时间根据目测最高浓度标准品的颜色,应为深蓝色,630读数,OD 值应在0.7以上;
13) 加入终止液(Stop Solution)(EL-CPI04)100ul 每孔。
加入终止液50ul-100ul,显色从蓝色转为黄色。建议采用450-630的双波读数。
注:根据实验设计不同的包被浓度,酶标二抗浓度,HRP浓度,反应时间等变量,找到最优化的实验条件。确定试剂盒定量范围、灵敏度等试剂盒特性。
双抗夹心法可以回归为线性、二次曲线,或者四参数曲线;
竞争法可以回归为log-logit,或者四参数曲线;
您可能会用到的其他包被产品:
产品货号
|
产品品名
|
功能
|
描述
|
规格
|
价格
|
EL-CPV-5
|
ELISA CPV
|
包被经济套装,包含Nunc 单条可拆酶标板 maxisorp,样品稀释液,生物素(Biotin)稀释液,HRP 保护剂
|
可包被5块板的套装2
|
5块板
|
400
|
EL-CPV-20
|
ELISA CPV
|
包被经济套装,包含Nunc 单条可拆酶标板 maxisorp,样品稀释液,生物素(Biotin)稀释液,HRP 保护剂
|
可包被20块板的套装2
|
20块板
|
1200
|
EL-CPV-50
|
ELISA CPV
|
包被经济套装,包含Nunc 单条可拆酶标板 maxisorp,样品稀释液,生物素(Biotin)稀释液,HRP 保护剂
|
可包被50块板的套装2
|
50块板
|
2400
|
EL-00402
|
ELISA 洗涤液
|
20*, 250ml/瓶,用于5块板的洗涤
|
用去离子水做20倍稀释
|
250ml
|
60
|
EL-00702
|
HRP辣根过氧化物酶标记Streptavidin
|
1:200,需要客户优化稀释条件
|
即用型
|
0.1ml
|
150
|
EL-00801
|
蛋白质稳定剂1
|
重组细胞因子等蛋白,用于稀释保存,活性降解慢,也可以用于标准品的冻干保存
|
即用型
|
20ml
|
100
|
EL-01203
|
0.01M PBS (干粉) PH7.2-7.4
|
加2L 可稀释成1×PBS,可以替代样品稀释液等组分;也可加tween-20成为自配的洗涤液
|
粉剂
|
2L
|
15
|
EL-01202
|
BSA
|
从Roche分装
|
冻干粉
|
5g/瓶
|
40
|
另可电询多款Biotnt 常用进口分装HRP 标记二抗。