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BioTNT现提供Preci®引物对
BioTNT公司精准引物产品（Precise Primer Pair）从NCBI获取全球最全最新的生物核酸序列，精确提供目标基因的SYBR® Green qPCR检测引物，备有大量库存的引物、阳性模板以及相关试剂，如定制的项目如仅需1周生成引物。 |
BioTNT全面引物产品解决方案
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特色产品
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经验证的Preci®引物对
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高特异性和灵敏度：低非特异性结合的理想之选，目标基因序列的100%匹配以及最强的初始扩增信号
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可重复的结果：严格的QC要求确保每批次都具有一致的性能
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可靠的产品质量：公司实验室平行实验使用引物，控制引物使用风险
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对数据充满自信：每种引物通过阳性模板验证，确认实验数据真实可靠
研究用引物
针对mRNA、microRNA、lncRNA、基因组DNA、质粒DNA提供超过20多万种引物及相关试剂
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查看mRNA用引物
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针对SYBR® Green
qPCR、PCR array、普通PCR、SNP、ChIP提供多用途引物及相关试剂
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Green qPCR用引物
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array用引物
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查看SNP用引物
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查看ChIP用引物
定制引物产品；
拥有 30 年定制引物生产专业知识，包括基因查找比对、转录本确认、大规模引物设计、批量引物生产以及下游处理。
了解定制引物产品
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引物浓度：2μM
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引物包装：上游引物，下游引物各一支
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储存温度：-20℃
配套试剂
普通PCR 和 qPCR 引物的设计原则有相同也有不同；
相同处：
• 序列的查找是一致的；
• 序列选取应在基因的保守区段；
• 选取合适的扩增片段大小
• 避免引物自身或与引物之间形成4个或4个以上连续配对；
• 避免引物自身形成环状发卡结构；
• Tm值在55－65℃，GC含量在40%－60%；
• 引物之间的TM相差避免超过2℃；
• 引物的3’端避免出现3个或3个以上连续相同的碱基；
不同处：
Real time PCR 引物
• PCR 产物长度；real-time PCR要求在300bp以内，一般首选80-150bp 之间；
• 多对目的基因同时扩增，文献上查来的引物条件会不同，需要设计尽可能条件一致的引物；
• 目的基因含量比较低时，需要设计灵敏度比较高的引物；
• 相对电泳法，Real time PCR灵敏度比较高，对引物的要求更高，引物二聚体要少；熔解曲线要求单一产物；
• Real time PCR的目的是进行定量或者相对定量，对扩增的效率有要求；对引物的二级结构要求高；
普通PCR 引物：
• 根据实验的要求不同，长度一般是从150bp到几千bp 不等；
• 对二级结构要求没有real time PCR 高；
• 对扩增效率要求不高；
• 可以选用梯度PCR 仪，选择不同退火温度，对引物退火温度要求不需要一致；
验证时不同：
引物的特异性（相同点）：
Ø 引物的特异性在使用前用blast 来保证；
不同点：real time PCR
Ø 在实验结果中通过熔解曲线来验证；
Ø PCR的特异性产物峰应与引物报告中的PCR product 相差在两度之内；
普通PCR 通过产物的长度，跑条带，来鉴别产物的特异性；
Real time PCR 可以通过扩增曲线，熔解曲线分析来鉴别产物的相对量，同时也可以对终产物进行电泳分析，更全面，更科学！
BioTNT 生物技术服务部积累多年的引物设计服务经验，现推出BioTNT 引物筛选和引物设计服务。
引物筛选服务与引物设计服务的差异在于，引物筛选增加了对客户的样本验证。
客户可以选择提供样本或者不提供样本；BioTNT 设计的引物同时在客户的样本和BioTNT实验的样本上同时验证，BioTNT 出库的引物至少保证，在其中的一种模板上是工作的；
如果该引物在客户提供的模板上不能工作，BioTNT 会提供相应的质检报告，告知客户；
客户一次科研经费，可以得到BioTNT 多重的超值技术服务！
1、人/大鼠/小鼠/其他动物的mRNA 引物筛选服务
2、microRNA 引物assay订购
3、LNC RNA（long nocoding RNA) 引物筛选
4、Chip QPCR 引物筛选
5、甲基化PCR（MSP) 引物设计
6、SNP PCR（ASP) 引物设计
7、 引物设计合成服务
引物筛选和设计合成的服务具体如下：
1、人/大鼠/小鼠/其他动物的mRNA 引物筛选服务：
A. 要求，客户提供基因名称，由BioTNT 对ncbi的数据库进行查找，如果找不到序列，与客户联系后确定是否进行下一步的服务；找到序列后由BioTNT 进行引物设计和合成Page 纯化级的引物（一般设计两套两对引物）；
B、客户提供CDNA 样本给BioTNT（上海市区BioTNT 可以上门取样，其他地区的样本需要客户自行解决）；
C、合成的引物用客户的CDNA 样本进行验证，比较效率，，选取扩增效率比较好的一对，得到客户样本的扩增曲线和熔解曲线，制作客户的定制引物说明书；
D、分装引物，量为上游和下游各1ml（10*浓度），客户采用20ul QPCR 体系可以进行500次反应；采用10ul QPCR 体系可以进行1000次反应；
E、客户使用过程中如果不能够检测，BioTNT 提供过程中的售后服务，如重新取样进行平行实验，查找客户其他原因；建议客户使用BioTNT的PCR premix，以便得到更好的实验结果；
F、mRNA一个基因的引物筛选费用为300元；
2、microRNA 引物assay订购
A. 要求，客户提供microRNA名称，由BioTNT 对mirabase的数据库进行查找，如果找不到序列，与客户联系后确定是否进行下一步的服务；找到序列后由BioTNT 进行引物设计和合成Page 纯化级的引物（一般设计两套）；客户必须至少订购一个BioTNT 成套的microRNA 试剂盒；
B、客户提供RNA 样本给BioTNT（上海市区BioTNT 可以上门取样，其他地区的样本需要客户自行解决）；
C、合成的引物用客户的RNA样本进行验证，比较效率，，选取扩增效率比较好的一对，得到客户样本的扩增曲线和熔解曲线，制作客户的定制引物说明书；
D、分装引物，量为逆转录 120test，QPCR 360次，客户采用20ul QPCR 体系可以进行360次反应；
E、客户使用过程中如果不能够检测，BioTNT 提供过程中的售后服务，如重新取样进行平行实验，查找客户其他原因；客户必须使用BioTNT的成套microRNA 试剂盒，才能得到好的实验结果；
F、microRNA一个基因的引物assay 促销价格为 600元；
3、LNC RNA（long nocoding RNA) 引物筛选：
A. 要求，客户提供LncRNA名称，由BioTNT 对数据库进行查找，如果找不到序列，与客户联系后确定是否进行下一步的服务；找到序列后由BioTNT 进行引物设计和合成Page 纯化级的引物（一般设计两套两对引物）；客户需要购买BioTNT premix 的试剂盒BioTNT 才会承接该项业务；
B、客户提供RNA 样本给BioTNT（上海市区BioTNT 可以上门取样，其他地区的样本需要客户自行解决）；
C、合成的引物用客户的RNA样本进行验证，比较效率，选取扩增效率比较好的一对，得到客户样本的扩增曲线和熔解曲线，制作客户的定制引物说明书；
D、分装引物，量为QPCR 1000次，客户采用10ul QPCR 体系可以进行1000次反应；
E、客户使用过程中如果不能够检测，BioTNT 提供过程中的售后服务，如重新取样进行平行实验，查找客户其他原因；客户必须使用BioTNT的Premix 试剂盒，才能得到好的实验结果；
F、LncRNA一个基因的引物筛选价格为 500元；
4、Chip QPCR 引物筛选
根据客户提供的基因序列，查找启动子区，前3000bp，可以根据情况设计三套CHIP 引物；
费用为300元/套；如果设计三套，费用为900元/三套；
客户提供基因组样本，由bioTNT进行验证；
由BioTNT 进行引物分装，提供给客户。
5、甲基化PCR（MSP) 引物设计：
A. 要求，客户提供基因名称和需要检测的区段（如启动子区3000bp），由BioTNT 对数据库进行查找，如果找不到序列，与客户联系后确定是否进行下一步的服务；找到序列后由BioTNT 进行引物设计和合成Page 纯化级的引物（一般设计至少两套，四对引物）；费用为：设计费500元，合成费用为1.5元/碱基。
B、提供引物干粉给客户。
C、从BioTNT 购买各品牌的甲基化检测试剂盒和premix 可以酌情减免引物设计费用，详情可向sales@biotnt.com 邮件咨询。
6、SNP PCR（ASP) 引物设计：
A. 要求，客户提供基因名称和SNP 位点，由BioTNT 对数据库进行查找，如果找不到序列，与客户联系后确定是否进行下一步的服务；找到序列后由BioTNT 进行引物设计和合成Page 纯化级的引物（一般设计至少两套，六条引物）；客户需要购买BioTNT premix 的试剂盒BioTNT 才会承接该项业务（5ml 及以上）；
B、提供实验条件给客户，由客户自行验证；
C、帮助客户进行分析；
D、如果购买BioTNT的mix（5ml以上）；可以用优惠的价格得到该项服务（200元/位点，三条引物设计），合成费1.5元/碱基；
F、如果不购买bioTNT 的premix，SNP一个基因的引物筛选，ASP价格的设计服务价格为 500元/位点，三条引物设计，合成费1.5元/碱基。
7、 引物设计合成服务：
A. 针对mRNA, BioTNT 可以承接引物设计和合成服务，客户需要购买BioTNT premix 的试剂盒BioTNT 才会承接该项业务（5ml 及以上）；
B、客户无需提供样本；序列的确认方式同引物筛选；BioTNT 针对序列，设计两套引物，设计费用暂时不收取；合成费用按照1.5元/碱基计算（按照70元/两条的平均价格计算也可）；合成的引物由BioTNT 根据情况，复溶后提供客户；
C、合成的引物BioTNT 不会用客户的样本进行验证；客户自己使用后，有义务向BioTNT 提供引物使用报告；
D、分装引物，提供给客户100pmol/ul， 共20ul的量，建议客户进行1:50倍稀释后，得到2pmol/ul ，当终浓度为2uM，10ul 体系时，客户可以进行1000次反应。
E、客户使用过程中如果不能够检测，客户仍应向BioTNT 支付引物和mix的费用；客户可以向BioTNT 提供引物使用报告后，要求BioTNT 再次设计和合成引物；或者要求转为引物筛选服务(增加200元/每基因）；
F、引物合成费用按照70元/两条的平均费用计算。
1、Q：引物序列什么时候提供？
A：引物序列一般是在付款后提供，提供方式见如下：
2、Q: 引物扩增的特异性如何保证？
A: 实验验证时，我们的引物一般是用tm 值来确认的；
方式：如下是我们示例的融解曲线，峰的位置是在80.4度；
这先是我们通过oligo 计算出来的理论值，也是在仪器上验证过的；
但不同仪器，不同mix 在仪器上会有所差异，一般差异不超过2度，都可能是正确的；但所有的差异都应该是同一个方向上的；
关于一般建议的验证方式顺序是：
a、TM 验证；（Biotnt 验证）
b、跑胶长度验证；(客户自己进行，请注意不要导致实验室污染）
c、测序验证（测序一般来讲，会有部分前后序列测不准，所以如果您要进行测序验证的话，产物长度一般要大于100bp）（客户自己进行）
3、Q:QPCR的引物长度一般是多少？
A: 关于扩增产物长度：biotnt 一般控制在150bp 之内；这样比较合适做QPCR，特别是两步法的扩增；
4、Q: 引物的扩增效率是多少？
A: Biotnt 引物是设计两对，我们挑选其中比较优的一对给您；
对于扩增效率，您需要自己去验证；一般扩增效率的验证有两种方法：
标准曲线法；或者是很多仪器自己有导出的；
这个我们不提供；
我们提供给您的引物，是两对引物中扩增效率比较优的一对；
简单 的delta delta CT 法，可以比较引物扩增曲线对数曲线的斜率，如果斜率平行，就可以使用delta delta CT 法进行实验和计算；
如果斜率不平行，可以使用相对定量的标准曲线法；
5、 Q： Biotnt 引物提供的浓度是多少？
A：BioTNT 为了方便客户使用，提供的引物浓度为2umol/l， 在终反应体系里是10*的浓度，即20ul 体系中，上游引物加入2ul，下游引物加入2ul。
6、Q：引物序列提供后，我如果想知道引物的特异性，该如何进行blast？
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问题
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解决
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样本没有检测
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核对您的样本种属和基因名称，样本种属有特异性；
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杂乱的熔解曲线
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检查样本内参CT 值，目的基因CT 值：如果样本内参CT 值比较高，目的基因CT 值也比较高，说明样本质量不好，建议更换样本；
如果内参CT 值正常，目的CT 值比较高，熔解曲线杂乱是正常的，说明：可能没有input 目的RNA； 更换阳性样本进行检测；
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熔解曲线峰与BioTNT mRNA引物产品说明书中提供的tm值不一致
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使用biotnt premix，目的产物峰应与引物说明书的Tm 相差不超过两度；如果相差比较大，说明产物不对，建议更换样本或者更换premix。
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熔解曲线峰双峰：在目的产物峰左侧75度左右有一个产物
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75度的峰为引物二聚体峰：CT 值大于33时，出现引物二聚体峰，是正常的；如果CT值低于33，出现引物二聚体和产物的双峰，建议更换biotnt premix 或者更换引物。
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熔解曲线峰双峰：在目的产物峰右侧有一个产物峰
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可能为基因组DNA 产物峰；由于biotnt 为验证过的引物（用biotnt QPCR premix验证），如果样本质量不合格，含有基因组污染，则当引物为跨外显子检测时，部分样本会在目的产物峰右侧出现一个峰（显示样本含有基因组污染），建议重新提取样本或对样本进行DNase 处理；
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引物售后：请提供以下实验数据发送到biotnt@biotnt.com，并抄送给相应的销售；
建议客户使用引物进行实验时设定RNA阴性对照;
设定对照的方式：样本1数据（目的+内参），阴性水样本数据（目的）;设定样本RNA阴性对照（样本的RNA，按照逆转录的稀释比进行稀释），同样做QPCR， 看样本是否存在该基因的基因组污染。